Tesis de Licenciatura: Transformación del hongo ectomicorrícico Pisolithus tinctorius mediada por Agrobacterium tumefaciens

VALDEMOROS D, PARDO AG

Universidad Nacional de Quilmes

Lugar: Bernal; Año: 2002 p. 61

Resumen Bajo condiciones naturales las raíces de mas del 80 % de las plantas superiores están asociadas en simbiosis mutualistas con hongos del suelo formando micorrizas. Las ectomicorrizas son muy importantes desde el punto de vista económico y ecológico debido a que forman simbiosis con las raíces finas de árboles incluyendo la mayoría de las especies forestales de bosques templados y boreales, tales como pinos, hayas, abetos y eucaliptos, y el micelio de una amplia variedad de hongos pertenecientes principalmente al grupo de los basidiomicetes. Las ectomicorrizas fomentan el crecimiento de las plantas hospedadoras debido a que incrementan la toma de nutrientes del suelo, siendo muy importantes para el crecimiento y la supervivencia. La ectomicorriza Pisolithus tinctorius-Eucalyptus globulus es un sistema modelo que ha sido estudiado extensivamente. Luego de varias décadas de una descripción detallada de la anatomía, fisiología y bioquímica de las ectomicorrizas, en los últimos años se han llevado a cabo progresos importantes a nivel molecular. Uno de los mayores contratiempos sufridos fue la carencia de un eficiente método de transformación. La transferencia del T-DNA por el fitopatogeno Agrobacterium tumefaciens ha sido exitoso no solo para las plantas hospedadoras naturales de la bacteria, sino también en bacterias, levaduras, células humanas, hongos filamentosos y recientemente en los hongos ectomicorrizicos Hebeloma cylindrosporum, Paxillus involutus y Suillus bovinus (Pardo et al., 2002; Hanif et al., 2002). El objetivo de esta tesis fue desarrollar el sistema de transformación del micelio de Pisolithus tinctorius por medio de A. tumefaciens. Para ellos se utilizo el gen Shble, que confiere resistencia a fleomicina, bajo el promotor y terminador del gen gpd de Schizophyllum commune. Para este estudio se utilizaron las cepas helper de A. tumefaciens LBA1100 y AGL-1. La transformación resulto en clones resistentes a fleomicina, los cuales mostraron poseer el transgen, en base a análisis de PCR. La eficiencia de la transformación obtenida fue la misma (40 %) con ambas cepas de A. tumefaciens.