PCR en tiempo real para el estudio de la calidad microbiana en aguas de baño.

PARAJE MG, CODONY F, ARADOS B, FITIPALDI M Y MORATÓ J.

Rosario

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

En la actualidad el control del riesgo sanitario de las aguas de año se realiza mediante el monitoreo de los niveles de marcadores bacterianos de  contaminación fecal con procedimientos de microbiología convencional  basados en el cultivo. Esta estrategia tiene como inconveniente que tanto la medida de la magnitud del riesgo como la toma de decisiones esta fuertemente condicionada por los tiempos de incubación, de 24 a 48 horas. Este retraso en detectar los episodios de contaminación hace que la gestión del riesgo  se base  en modelos predictivos y en la detección tardía de los episodios de contaminación. La aparición de técnicas moleculares cuantitativas, de gran sensibilidad, especificidad y de rápida ejecución probablemente hará que en los próximos años el seguimiento de la calidad de las aguas de baño se pueda realizar de manera mucho más directa. Por otro lado el cambio en la metodología de detección, en que se ha pasado de evaluar características fenotípicas a genotípicas, ha eliminado un requerimiento importante a la hora de seleccionar los modelos bacterianos indicadores de contaminación fecal. Es por ello que a nivel molecular la tendencia es utilizar al género Bacteroides como marcador de contaminación fecal. Ésta es la tendencia en las aguas continentales pues a la vez este grupo bacteriano también es útil en estudios MST (Microbial Source Tracking).  En este trabajo se pretende evaluar si, tal y como ocurre en aguas continentales, la detección de Bacteroides sp por PCR en tiempo real en aguas de mar puede llegar a ser un buen instrumento de vigilancia y control sanitario. Para ello se  realizó un estudio prospectivo en  las playas metropolitanas de Barcelona y Costa Brava( n=40). Se cuantificaron los niveles de Bacteroides sp. por PCR real time, y se contrastaron con los obtenidos por cultivo: E.coli (Agar Chromocult) y Enterococos intestinales (norma ISO 7899-2). La detección por PCR real time se realizó utilizando sondas Taqman en un termociclador Lightcycler 1.5. Los resultados mostraron buena correlación entre E.coli y Bacteroides cuando la calidad del agua fue buena. A medida que aumentaba la contaminación  la correlación fue menor entre cultivo y PCR real time. PCR real time permitió la obtención de resultados fiable, repetitivos y rápidos, por lo que se pueden contemplar como una excelente herramienta para su uso en la determinación de la calidad del agua y la evaluación del riesgo sanitario. Una de las principales limitaciones actuales de esta técnica, es la no diferenciación entre organismos vivos y muertos, es evidente, que la  determinación de los organismos viables, con capacidad infectiva, permitiría mejorar de forma radical las evaluaciones cuantitativas del riesgo sanitario.