Análisis de la variación de la osmolaridad sobre la formación de biofilm de Staphylococcus aureus.

ARCE MIRANDA, JULIO E; ALBESA, INES; PARAJE, MARIA GABRIELA.

Rosario

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología.; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

Numerosas evidencias demuestran que la variación de parámetros ambientales, tales como privación de nutrientes, exposición a agentes reductores, variación del pH, etc., influyen sobre los biofilms bacterianos; en los cuales, las células que lo conforman presentan modificada su actividad metabólica y fenotipo con respecto al índice de crecimiento y trascripción de genes, lo que por lo general le confiere una mayor resistencia al estrés ambiental. El objetivo fue evaluar la influencia de distintas concentraciones de NaCl y NaCl + Glucosa sobre el crecimiento, la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) y de óxido nítrico (ON) del biofilm en S.aureus. Se trabajó con una cepa clínica y una ATCC (N° 29213), determinando por microtécnica la capacidad de formar biofilm con coloración de Cristal Violeta (CV) y cuantificación por espectrofotometría a 590 nm. Las distintas cepas fueron cultivadas en Caldo Tripteína Soya (CTS), CTS con el 3% de NaCl, CTS con el 6% de NaCl y CTS con el 3% de NaCl + Glucosa 0,25% y se determinó el estrés celular mediantes la cuantificación de ROS por Azul de Nitro Tetrazolium (NBT) y ON con la técnica de Griess. Por Microscopía Confocal se estudió la conformación del biofilm. En nuestros experimentos se observó que tanto la cepa clínica, como la ATCC disminuyen la formación de biofilm con respecto a la condición basal tanto con NaCl 3% como con NaCl 6%, pero aumentó marcadamente con el agregado de NaCl 3% + Glucosa 0,25%. Analizando ROS intracelular, y realizando una relación estrés/crecimiento del biofilm, se pudo ver que dicho estrés se incrementó tanto con NaCl 3% como con NaCl 6%, con respecto al basal, para disminuir el mismo con el agregado de NaCl 3% + Glucosa 0,25%. Estos resultados se corroboraron mediante Microscopía Confocal. Analizando tanto los ROS extracelulares, como el ON se observó que los mismos tuvieron un comportamiento similar a lo antes mencionado, aumentando con NaCl 3% y 6%, y disminuyendo con NaCl 3% + Glucosa 0,25%. La formación del biofilm de S. aureus en presencia de distintas condiciones de osmolaridad, estaría directamente relacionados al estrés intra y extracelular de las células sésiles que lo conforman.