Actividad anticoagulante de nanopartículas metálicas obtenidas por biosíntesis procariota

K CRESPO1, M QUINTEROS1, PL PÁEZ2, MG PARAJE,

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

ALAM-CAM

Lasnanopartículas (Nps) metálicas son de gran interés debido a su ampliaaplicación en varios campos de la ciencia y tecnología. Dentro de estas Nps,las biosintetizadas por microorganismos han adquirido una gran importanciadebido a que son obtenidas por procesos naturales y económicos. Numerososmicroorganismos, tales como bacterias y hongos, se han utilizado parasintetizar estas partículas. Sin embargo, las bacterias son de elección debido asu fácil cultivo y manipulación genética. Diferentes actividades biológicascomo por ejemplo antimicrobianas y antioxidantes han sido descriptas para Npsmetálicas provenientes de bacterias. El objetivo de este trabajo fue evaluar laactividad anticoagulante de Nps de Hierro (Fe) biosintetizadas a partir deEscherichia coli y Pseudomonas aeruginosa.Para la biosíntesis intracelular de Nps se utilizó E. coli ATCC 25922 o P.aeruginosa ATCC 27853 las cuales fueron cultivadasen Caldo Tripteína Soya durante 18 h  37 °C con agitación a 200 rpm. Se mezclaron 15 ml delcultivo anterior con 1,5 ml de la solución metálica (1 mM) y se incubó enagitador (48 h-37 °C). Luego, la solución se sonicó a 80W 30 min y secentrifugó a 8500 rpm 5 min. Para el estudio de la biosíntesis extracelular setrabajó con el sobrenadante de los cultivos overnight.  La identificaciónde las Nps se llevó a cabo por Espectrofotometría UV-visible realizando unbarrido entre 200 y 800nm, observando el plasmón superficial de resonancia (SPR).Para determinar la actividad anticoagulante de estas Nps, se determinó elTiempo de protrombina (TP), Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (TTPA) yTiempo de trombina (TT) en plasmas obtenidos con citrato de sodio. Estos testson los utilizados con mayor frecuencia para evaluar este tipo de actividad,pudiendo evaluar tanto la vía extrínseca (TP) como la intrínseca (TTPA).Cuando se evaluó el TT, el agregado de Nps (2,4 mg/mL) a muestras de plasmaresulto en un retraso en la formación del coagulo con respecto al control(Solución Salina), indicando una actividad anticoagulante de las Nps. Paraevaluar la vía de coagulación por la cual se produce este efecto, las víasextrínseca e intrínseca fueron evaluadas. En este trabajo se observó que eltratamiento con las Nps alargó los tiempos de formación del coagulo para laprueba TTPA, sin modificación de la prueba TP.Los resultados demuestran la actividad anticoagulante de Nps de Febiosintetizadas extracelularmente a partir de E. coli por una vía intrínseca sinuna aparente modificación de la vía extrínseca. Estos estudios contribuyen a lameta del probable uso de Nps provenientes de biosíntesis para el tratamiento dediferentes patologías incluidas aquellas relacionadas a los trastornos de lacoagulación.