Actividad antibiofilm de ácido usnico sobre biofilms de Candida albicans resistente a azoles.

M DA SILVA, MG ORTEGA, JL CABRERA, MG PARAJE, MA PERALTA.

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

ALAM-CAM

IntroducciónLa aparición continua de infecciones con cepas de Candida resistentes a losantifúngicos de uso corriente requiere la búsqueda constante de nuevos fármacosantifúngicos y la flora nativa es una fuente importante de nuevas estructurasquímicas. El ácido úsnico (AU) es un metabolito secundario obtenido a partir delíquenes del genero Usnea con demostrada actividad contra bacterias, hongos,protozoos y virus. Sin embargo, aún se desconoce el mecanismo de su actividadantimicrobiana y su acción sobre biofilms de levaduras.ObjetivoEl objetivo de este trabajo es cuantificar la acción de AU como agenteanti-biofilms estudiando la acción sobre biofilms de Candida albicans ycomparar su actividad con Fluconazol (FLZ).Materiales y MétodosCompuesto: AU se purificó a partir del extracto bencénico de líquenes delgénero Usnea.Microorganismos: cepas de C. albicans aisladas de la cavidad bucal, unasensible (CaS) y una resistente a azoles (CaR) que sobre expresa genestransportadores de bombas de eflujo de tipo CDR1, CDR2 y MDR1.Formación de biofilms: se midió por adhesión a placa de 96 pocillos y secuantificó mediante tinción con Cristal Violeta (CV) y lecturaespectrofotométrica de la Densidad Óptica (DO). La unidad de biomasa de biofilm(UBB) se definió como 0.1DO595nm=1UBB. Se realizó el recuento de UnidadesFormadoras de Colonias (UFC/ml)Actividad antifúngica: Diferentes concentraciones de AU (2-128 µg/ml) disueltoen dimetil sulfóxido (DMSO) o FLZ (0,25 a 2 µg/ml) se añadieron a cada pocilloconteniendo el biofilm maduro. Después de la inoculación, se incubó a 37°Cdurante 48h. Después del tratamiento antifúngico, el sobrenadante se eliminó,lavó y sonicó. Se realizó el recuento de UFC/ml para los estudios decorrelación con BBU.Se determinó la  Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) por el Método demicrodilución para levaduras,  según protocolo de Métodos estandarizadospor el CLSI (M27- A3) y la concentración de UA o FLZ que logra la máximainhibición del biofilm (BIC)ResultadosLa concentración 4 µg/ml de UA fue determinada como la BIC de este compuesto,ya que mostró la máxima inhibición del biofilm en ambas cepas: 87,84% para CaS(*** p> 0,001) y 71,08% para y CaR (** p> 0,01). Valores de inhibiciónsimilares se obtuvieron con 2 µg/ml de FLZ (BIC de FLZ). Las células viables sedeterminaron por recuento de UFC/ml y los resultados mostraron una buenacorrelación con el ensayo de CV.ConclusiónEl biofilm de C. albicans se redujo en presencia de AU, incluso en la cepa resistenteCaR. Como era de esperar para una cepa sensible, se observó que la inhibiciónfue más significativa en el biofilms de CaS. Los resultados obtenidos potencianla importancia de AU como antifúngico anti-biofilms que se podría utilizar paratratamientos contra C. albicans, abriendo nuevas perspectivas para realizarestudios de combinación con otros antifúngicos con el fin de mejorar eltratamiento de biofilms de C. albicans resistentes a antifúngicos clínicos.