Formación de biofilm de Escherichia coli O157:H7 em distintas condiciones de cultivo.

2.43 ANGEL VILLEGAS N; BECERRA MC; ALBESA I; SUAREZ ME; PARAJE MG.

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología.; 2008

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC), incluido el serotipo O157:H7, es un patógeno de trans¬misión por alimentos que puede causar enfermedades severas y potencialmente fatales para el hombre. Es el principal agente causal de gastroenteritis que puede complicarse con colitis hemorrágicas y síndrome urémico hemolítico. También es el prototipo de más de 150 serotipos que comparten el mismo potencial patogénico. Se ha descrito la capacidad de E.coli O157:H7 de formar biofilm en diversas superficies, sin es un aspecto poco estudiado. El objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad de formar biofilm en cepas de E.coli O157:H7 evaluando el estrés oxidativo de las células sésiles en distintas condiciones de cultivo: superficies con distinta hidrofobicidad; presencia de agentes reductores y en microaerofilia. Se estudiaron doce cepas de E.coli (1 a 12) provistas por un Hospital pediátrico de Córdoba Capital, investigando la formación de biofilm “in vitro” por macrotécnica en tubos de vidrio y plástico y por microtécnica en placas de ELISA. Se incubaron a 37ºC durante 72 h en caldo nutritivo y en tiglicolato, y ambos en aerofilia y en microaerofilia. Se retiró el sobrenadante, se fijó y se coloreó con Cristal Violeta (CV) cuantificando la Densidad Óptica (DO) a 590 nm. La generación de Especies Reactivas del Oxígeno(ERO) en el sobrenadante se evaluó mediante la reacción de Nitroblue Tetrazolium (NBT). Por microscopía confocal se estudió la ultraestructura del biofilm. La formación del biofilm no dependió de las características del soporte al cual se unió, determinada por macrotécnica y pero sí de las condiciones de cultivo, estudiada por microtécnica. Por ambas técnicas mencionadas, una sola cepa mostró alta formación de biofilm (DO: 1,365  DS) mientas que las restantes mostraron baja capacidad. Sin embargo, la cepa con capacidad de formar biofilm disminuyó cuando se cultivó en condiciones de microaerofilia (DO: 0,787  DS), aumentando el estrés extracelular (ROS) al doble. En presencia de un medio reductor (tioglicolato) se observó formación de biofilm en esta cepa (DO: 1,189  DS), mientras que en microaerofilia se redijo notablemente (DO: 0,316  DS). La generación de ERO incrementó cuatro veces en estas condiciones. Las cepas que tuvieron baja formación de biofilm mostraron un alto estrés en el medio extracelular. Es un aspecto futuro a investigar es la relación del biofilm en E.coli157:H7 y las enfermedades que produce, con el estrés oxidativo de las células sésiles que forman esta compleja estructura. .