Informe Técnico Final PICT 2003 No.13578

ESPINOZA F; ORTIZ JPA; QUARIN CL

2008-06-01/2008-06-30

1-8

Biológica

Produccion vegetal-Forrajes

Las actividades realizadas en el período 2005-2008 estuvieron dirigidas a cumplimentar los objetivos previstos en el plan de tesis: ?Estudios de factores genéticos y epigenéticos sobre la expresión de la apomixis en Paspalum notatum? cuyos objetivos generales son determinar la abundancia relativa y distribución de la metilación de secuencias CCGG en razas diploides y tetraploides (sexuales y apospóricas) de Paspalum notatum, establecer si existe relación entre el grado de metilación y la expresión de la apomixis e identificar genes relacionados al carácter a partir de fragmentos genética y funcionalmente relacionados a la aposporía en la especie. Se realizaron experimentos de metilación con marcadores moleculares de MSAP y RFLP, se describió la estructura epigenética de especies diploides y tetraploides (sexuales y apomícticos) de P. notatum, se determinó su relación con la variabilidad genética natural de la especie y se estudió el estado de metilación de la región genómica responsable de la aposporía. Por otra parte se evaluaron los cambios epigenéticos en autotetraploides sintéticos de P. notatum, utilizando el genotipo diploide C4-2x (2n = 2x = 20) y su contraparte autotetraploide C4-4x (4n = 4x = 40) recientemente sintetizado por tratamientos con colchina. Con el objetivo de desarrollar marcadores alelo-específicos que cosegreguen con la aposporía, fragmentos de AFLP polimórficos asociados al modo de reproducción fueron clonados y secuenciados. Se diseñaron cebadores específicos para cada extremo de los fragmentos clonados y se llevó a cabo la optimización de las condiciones de amplificación. Se desarrolló un marcador SCAR (PNA1 o Paspalum notatum apospory 1) que fue validado en la población de mapeo (n=45), resultando 100% ligado al locus responsable de la aposporía. Cuando este marcador se ensayó sobre una población natural diploide localizada en el centro de la provincia de Santa Fé (Cayastá), se encontró que el mismo está presente en una proporción p=0.17. Este resultado indicaría que el/los factores determinantes del carácter están presentes al nivel diploide, aunque su expresión estaría reprimida. Por otro lado, con el fin de saturar el mapa genético de la especie al nivel tetraploide que se desarrolló en nuestro laboratorio se generaron fragmentos de AFLP. Varios de ellos resultaron completamente ligados a la aposporía. Las actividades realizadas en este punto fueron incluidas en el artículo: Stein J, Pessino SC, Martinez EJ, Rodriguez MP, Siena LA, Quarin CL and Ortiz JPA. (2007) A genetic map of tetraploid paspalum notatun Flugge (bahiagrass) based on single-dose molecular markers. Mol Breeding. Vol. 20, 153?166.