Puesta a punto de extraccion de ARN total y expresion de interleuquina-1 mediante rt-pcr en muestras de leche bovina

BARAVALLE C; ALFARO N; ANDREOTTI C; DALLARD B; CALVINHO LF; ORTEGA HH

Cordoba

Congreso; 10 Congreso Argentino de Ciencias Morfologicas.; 2008

Las interleuquinas (IL) forman un subgrupo dentro de las citoquinas. Las  IL-1α y la IL-1β son producidas principalmente por monocitos-macrófagos. El objetivo del trabajo consistió en optimizar la extracción de ARN total de células somáticas en leche bovina seguida de trascripción reversa acoplada a la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) para determinar la expresión de estas citoquinas. El ARN total del pellet de células somáticas de leche se extrajo con TRIZOL® LS. Para la preparación del ADNc se tomó una alícuota del ARN extraído y se lo trató con la enzima M-MLV (Transcriptasa Reversa). Al producto de la reacción se le realizó PCR utilizando primers para IL-1α y  IL-1β. El número de ciclos realizados y la temperatura de anneling se pusieron a punto previamente para cada par de primers.  Se realizaron controles negativos que consistieron en la amplificación del ARN total sin realizar retrotranscripción con ambos primers. Los productos amplificados se analizaron en un gel de agarosa al 2%. Mediante el análisis no-cuantitativo se determinó la presencia de dos bandas, una en aproximadamente 300 pb (para la calle sembrada con la muestra amplificada con primers para la IL-1α) y otra banda en 230 pb (para la amplificada con primers para la IL-1 β). No se observaron bandas en los controles negativos. Podemos concluir que el método de extracción de ARN utilizado, la selección de los primers y las condiciones empleadas para la amplificación de las IL-1 (α  y β) fueron adecuadas para leche bovina y pueden ser de utilidad para futuros trabajos en leches con células somáticas aumentadas.