INVESTIGADORES
ORTEGA Hugo Hector
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión del receptor tipo I del factor de crecimiento análogo a insulina en ovarios de animales con enfermedad quística ovárica bovina
Autor/es:
COLOMBERO, M; RODRIGUEZ, MF; MATILLER, V; BENITEZ, G; ORTEGA HH; REY F
Lugar:
Casilda
Reunión:
Jornada; XIII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas en Ciencias Veterinarias.; 2012
Resumen:
La Enfermedad
Quística Ovárica (COD) es uno de
los desórdenes reproductivos más frecuentes en vacas lecheras. Los quistes
foliculares afectan a las vacas de alta producción durante el posparto,
prolongando el período parto-concepción y ocasionando pérdidas significativas
en la producción pecuaria (4). La progresión a través de los sucesivos estadios de desarrollo folicular se
encuentra regulado a nivel endocrino y local donde se destaca la participación
activa del sistema de IGFs, regulando el desarrollo y funcionalidad folicular,
sea sólo o en sinergia con las gonadotrofinas (1). Dicho sistema está
compuesto por dos ligandos (IGF1 e IGF2), 6 proteínas de unión (IGFBPs), IGFBP-proteasas
específicas y dos receptores (IGFR-I e IGFR2). El receptor tipo 1 (IGFR1) es un
receptor de tipo tirosin-quinasa que se une con alta afinidad al IGF-I y en
menor grado a IGF-II (2).. La hipótesis del
presente trabajo considera que el IGF-I y sus receptores (IGFRs) cumplen
funciones determinantes en la regulación del desarrollo folicular, por lo tanto
se podría postular que ejercen un rol fundamental en la patogénesis de la COD.
Es por ello que en nos propusimos evaluar la expresión proteica de IGFR1 en
quistes foliculares espontáneos provenientes de animales a campo, inducidos experimentalmente
y en folículos controles.
Se utilizaron
muestras de vacas con quistes espontáneos obtenidas a campo (n=10), y muestras
de animales experimentales, cuyos ciclos estrales fueron sincronizados
previamente, y luego divididos en dos grupos. En uno de ellos, se indujo la
enfermedad por medio de la administración de ACTH (n=5), y el otro se mantuvo
como grupo control (n=5). Luego de la confirmación del desarrollo de quistes
por ultrasonografía se realizó la ovariectomía y se obtuvieron muestras de
ovarios (2) que fueron fijadas en formaldehído bufferado 4% y procesadas según
protocolos de rutina hasta inclusión en parafina. Se efectuaron cortes de 4 mm
de espesor, sobre los que se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta
específica para IGFR-I. Se realizó recuperación antigénica con buffer citrato
(pH 6) en microondas, la inactivación de la peroxidasa endógena con agua
oxigenada en metanol 1% y el bloqueo de uniones inespecíficas con suero normal
de cabra y se incubó con el anticuerpo primario específico. El revelado se
realizó utilizando un anticuerpo secundario biotinilado y la reacción se
visualizó utilizando 3,3' diaminobencidina como cromógeno. Se evaluó la
inmunomarcación en células de la granulosa y de la teca durante el crecimiento
folicular y en estructuras quísticas sobre imágenes digitalizadas utilizando el
programa de análisis de imágenes Image Pro-Plus 3.0. Se midió el porcentaje de
área inmunomarcada para cada capa folicular y las diferencias obtenidas se
analizaron estadísticamente con el programa SPSS para Windows 11.0.1.
La expresión de IGFR1
fue significativamente mayor en folículos terciarios y quistes, con respecto a
las demás estructuras foliculares ( 37,32 ± 1,57 vs 9,89 ± 0,53, p<0.05).
En todos los estadios foliculares analizados se observó una menor marcación en
estructuras provenientes de COD inducida con respecto a los folículos provenientes
de COD espontánea (25,86± 2,53 vs 37,32 ± 1,57, p<0.05). Los
resultados obtenidos determinaron que el IGFR1 no se expresó en células de la
teca, mientras que en células de la granulosa, se observó expresión en la
membrana celular en todas las estructuras foliculares analizadas. Se determinó
un patrón de marcación creciente a medida que aumenta el desarrollo folicular.
Teniendo en cuenta que
previamente en nuestro laboratorio observamos una disminución en la expresión de
IGF1 en animales con COD (3) y basados en los
resultados obtenidos en este trabajo, podríamos inferir que un aumento en la
expresión de IGFR1 estaría relacionado a un incremento en las posibilidades de
captar las menores concentraciones de IGF1 presentes en situaciones de animales
con COD, indicando así un posible mecanismo de regulación intrafolicular del
crecimiento folicular y el posible desarrollo de la enfermedad. De esta manera,
los resultados obtenidos en el presente trabajo apoyan la hipótesis de un rol
fundamental del sistema IGF, ayudando a una mejor comprensión acerca de su
participación en el desarrollo de la enfermedad.