Los medios condicionados de células epiteliales mamarias benignas MCF-10A irradiadas aumentan el daño al ADN y la inestabilidad cromosómica en líneas tumorales mamarias irradiadas

GUADALUPE VEDOYA, TAMARA GALARZA, NORA MOHAMAD, GRACIELA CRICCO, MARCELA LÓPEZ NIGRO, GABRIELA MARTIN.

Jornada; XXXIII Jornadas Multidisciplinarias De Oncología. Instituto de Oncología Ángel Roffo; 2018

En el esquema radio-terapéutico más convencional en cáncer de mama post-cirugía conservadora, el campo de irradiación incluye células epiteliales mamarias benignas y posibles células tumorales remanentes. El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto de los factores secretados por las células epiteliales mamarias benignas MCF-10A irradiadas sobre el daño al ADN y la inestabilidad cromosómica en células tumorales mamarias irradiadas MCF-7 y MDA-MB-231. Para ello se incubaron las células tumorales irradiadas (I) y no irradiadas (NI) con los medios condicionados de las células MCF-10A irradiadas (MCI) y no irradiadas (MCNI). Evaluamos el daño de doble cadena al ADN mediante la detección de focos de histona fosforilada γ-H2AX por inmunofluorescencia indirecta. En las células tumorales NI se observó una frecuencia basal de focos de γ-H2AX (0,5±0,4 %) sólo en las MDA-MB-231. En ambas líneas tumorales I registramos un incremento significativo en los focos de γ-H2AX hasta los 30 min post-irradiación, seguido de un descenso rápido hasta las 2 h y lento hasta las 48 h. Posteriormente observamos ausencia de focos en las MCF-7 I y una frecuencia similar a los controles NI en las MDA-MB-231 I. En cambio, los MCI o MCNI indujeron dos ciclos de aparición y desaparición de focos de γ-H2AX en ambas líneas tumorales I y NI: uno a los 30 min y otro a las 24 h. Focos residuales permanecieron hasta 9 días y la frecuencia fue mayor cuando se utilizaron los MCI.Realizamos también el ensayo citoma que detecta micronúcleos (MN, medida de pérdida o rotura cromosómica), puentes internucleares (PI, marcadores de re-arreglo cromosómico o telómeros disfuncionales y brotes nucleares (BN, marcadores de amplificación génica). Las MDA-MB-231 NI mostraron una frecuencia de MN, PI y BN superior a las MCF-7 NI, evidenciando mayor inestabilidad cromosómica basal. En ambas líneas tumorales I observamos 72h post-irradiación un incremento en la frecuencia de los 3 marcadores. Los PI y BN disminuyeron a los 9 días; los MN persistieron con una frecuencia superior a la de las células NI. Los MC y MCI también aumentaron los MN, PI y BN en las celulares tumorales I y NI, con persistencia de MN y siendo en muchos casos mayor el efecto de los MCI.Estos resultados indican que las células mamarias normales pueden aumentar el daño al ADN y la inestabilidad cromosómica de las células tumorales, lo que podría tener consecuencias en la eficacia de la radioterapia.