Generación de aductos fluorescentes por la irradiación UV-A de nucleósidos de timina en presencia de pterina bajo condiciones anaeróbicas.

SANDRA ESTÉBANEZ; CAROLINA LORENTE; ANDRÉS H. THOMAS

San Miguel de Tucumán

Congreso; III Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos ?GRAFOB DEL BICENTENARIO? (III GraFob); 2016

Grupo Argentino de Fotobiología

Introducción: La mayor parte de laradiación solar que alcanza la superficie de la tierra pertenece al rango UV-Adel espectro (320 ? 400 nm). Este tipo de radiación prácticamente no esabsorbido por moléculas de ADN, por lo que normalmente no genera fotolesionessobre dichas moléculas de forma directa. Sin embargo, la radiación UV-A puedeproducir daños de forma indirecta a través de reacciones fotosensibilizadas, yes reconocida como un carcinógeno de clase I [1]. Una reacción fotosensibilizadaes una modificación fotoquímica que ocurre en una entidad molecular comoresultado de la absorción inicial de radiación por un fotosensibilizador [2].Las pterinas pertenecen a una familia de compuestos heterocíclicos que estánpresentes en una amplia variedad de sistemas vivos, y además participan ennumerosas funciones biológicas importantes. Bajo excitación UV-A (320 ? 400nm), las pterinas pueden fluorescer, experimentar fotooxidación y generarespecies reactivas de oxígeno (ROS) [3]. En presencia de oxígeno, la pterina(Ptr) actúa como fotosensibilizador a través de un mecanismo tipo I(abstracción de un electrón) y/o tipo II (oxidación a través del 1O2)[4-5].Objetivo: Aislar y caracterizar unproducto generado en la reacción fotosensibilizada por Ptr del nucleósidopirimidínico 2?deoxitimidina (dT). En estudios previos se determinó que esteproducto es un aducto de Ptr y dT con una relación 1:1.Materiales: Pterina (Ptr), 2?deoxitimidina (dT), Acetonitrilo (ACN),agua deuterada (D2O); peachímetro sensION+pH31 GLP combinado con unelectrodo de pH 5010T (Hach), lámparas Rayonet 3500RPR, espectrofotómetro ShimadzuUV-1800, HPLC Prominence de Shimadzu con una columna Synergi Polar-RP 80A (150 x 4.6, 4 mm, Phenomenex), espectrofluorómetroSingle-photon-counting FL3 TCSPC-SP(Horiba Jobin Yvon).Experimental: Se irradiaron solucionesacuosas de dT y Ptr a pH 5.5 (lex=350 nm) bajo condiciones anaeróbicas a temperaturaambiente. Las soluciones se monitorearon por espectrofotometría UV-Vis y HPLCcon detección espectrofotométrica y fluorométrica. El producto se aisló con elHPLC, empleando una columna de fase reversa. Como fase móvil se utilizó unamezcla de agua-ACN (97-3) con un flujo de 1mL/min.Bajo condiciones anaeróbicas, se observa la generaciónde un aducto entre la Ptr y la dT. Este aducto fue aislado, y se registraronlos espectros de absorbancia, de emisión y el tiempo de vida. Además sedeterminaron los rendimientos cuánticos de fluorescencia y de generación deoxígeno singlete.Conclusión: La Ptr es capaz de fotoinducirmodificaciones químicas a la dT. En ausencia de oxígeno y medio ácido se formaun aducto estable entre la Ptr y la dT con una relación 1:1. Este producto presentapropiedades espectroscópicas similares a la Ptr. El tiempo de vida y elrendimiento cuántico de fluorescencia del aducto son ligeramente inferiores alos de la Ptr. El rendimiento cuántico de generación de oxígeno singlete deladucto es menor al de la Ptr, pero no es despreciable. Referencias 1-ElGhissassi F., Baan R., Straif K., LancetOncol, 10, 51, 2009.2-Braslavsky S., Pure App. Chem., 79, 293, 2007.3-LorenteC., et. al., Acc. Chem. Res., 39, 395, 2006.4-Petroselli G., et. al.,J. Am. Chem.Soc., 130, 3001, 2008.5-PetroselliG., et al., Org. Biomol. Chem., 5, 2792, 2007.