Obtención de nucleósidos de 2,6-diaminopurina mediante transglicosidación microbiana

ROSARIO MÉDICI, ELIZABETH S. LEWKOWICZ, ADOLFO M. IRIBARREN

Montevideo

Encuentro; Biocatálisis y Biotransformaciones 2004, 1º encuentro regional; 2004

UdelaR

Los análogos de nucleósidos son extensamente utilizados en terapias antivirales y contra el cáncer. En nuestro laboratorio se ha estudiado la síntesis de nucleósidos purínicos mediante reacciones one pot utilizando células enteras como catalizadores. Esta biotransformación, llevada a cabo por enzimas tales como las nucleósido fosforilasas, utilizan nucleósidos pirimídinicos como donores de pentosa y bases purínicas como moléculas aceptoras. En particular, los métodos biocatalizados de obtención de nucleósidos de guanina utilizan condiciones extremas de pH o disolventes orgánicos debido a la baja solubilidad de la base en cuestión. Una metodología alternativa plantea el uso de otros materiales de partida más solubles como ser la 2,6-diamino purina. Los nucleósidos así formados son sustratos de la enzima adenosín deaminasa (ADA) y por consiguiente pueden ser transformados secuencialmente a los correspondientes derivados de guanina. Para la realización de este último paso se pueden utilizar tanto células enteras como enzimas aisladas. Para alcanzar el fin propuesto, en este trabajo se abordó la síntesis de diversos nucleósidos de 2,6-diaminopurina mediante transglicosidación microbiana. Para llevarla a cabo, se utilizaron distintos nucleósidos pirimidínicos, entre ellos uridina, timidina, 1--arabinofuranosiluracilo y 2?,3?-didesoxiuridina. Las reacciones se realizaron a 60ºC o 45ºC, dependiendo del nucleósido de partida, en presencia de fosfato inorgánico, los sustratos correspondientes y el biocatalizador. Para la selección del mejor biocatalizador, en cada caso se utilizó la metodología de screening desarrollada en el laboratorio a partir de un cepario de más de 100 bacterias. Varios microorganismos provenientes de distintos géneros han demostrado habilidad en la preparación de los correspondientes derivados de 2,6-diaminopurina dando porcentajes de conversión que en la mayoría de los casos supera el 80%. La cuantificación de productos se realizó por HPLC mientras que la presencia de los mismos fue confirmada en su mayoría, por HPLC-EM.