CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA Y MOLECULAR DE MONOCAPAS DE DPPC Y PROTEINA MARCKS

M. F. TORRESÁN; J. KLUG; G. BORIOLI; G. I. LACCONI

Rosario

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2013

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA Y MOLECULAR DE MONOCAPAS DE DPPC Y PROTEINA MARCKS María Fernanda Torresan1, Joaquín Klug2, Graciela Borioli1, Gabriela Lacconi2 1CIQUIBIC, Dpto. Qca. Biológica, Facultad de Ciencias Químicas. UNC. 5000 Córdoba. 2INFIQC, Dpto. Fisicoquímica, Facultad de Ciencias Químicas. UNC. 5000 Córdoba. gabriela.lacconi@gmail.com Introducción: MARCKS (del inglés Myristoylated Alanine Rich C Kinase Substrate) es una proteina que puede asociarse a la membrane celular lipídica debido a su carácter anfitrópico. Además es una proteína intrínsecamente desestructurada que se encuentra involucrada en los procesos de señalización celular relacionados con el desarrollo neuronal. A diferencia de la mayoría de los estudios biofísicos de MARCKS, los cuales sólo utilizan la secuencia de aminoácidos correspondiente a su Dominio Efector (ED), la presente comunicación incluye el estudio utilizando la proteína recombinante completa [1]. La espectroscopía Raman ha demostrado ser una herramienta muy útil en los estudios de caracterización de superficies e interfases. Las superficies de algunos metales (Cu, Ag y Au) pueden ser nanoestructuradas por diversos métodos, para que las señales de los adsorbatos sean incrementadas enormemente por efecto de la superficie (espectroscopía Raman exaltada por la superficie, SERS) [2]. Objetivos: Determinar las propiedades viscoelásticas de monocapas de lípidos y proteína MARCKS y los tipos de interacciones que se establecen entre MARCKS y los fosfolípidos, mediante ensayos de monocapas interfaciales. Por otra parte, se buscó la identificación molecular de las especies en las monocapas mediante espectroscopía SERS. Resultados y Discusión: En este estudio se realizó la deposición electroquímica de nanoestructuras de Ag mediante barridos potenciodinámicos y pulsos de potencial aplicados a electrodos hidrogenados de Si(111). La estructura de las nanopartículas fue determinada por Microscopía Electrónica de Barrido (SEM) y la actividad SERS de los sustratos obtenidos fue establecida por la intensificación de las bandas vibracionales de Rodamina G. Mediante la técnica de Langmuir-Blodgett se transfirieron las monocapas de DPPC y MARCKS y mezclas de ambos a los sustratos activos SERS. Respecto a las monocapas lipídicas, se observaron diferencias en los espectros SERS indicando el grado de ordenamiento de las moléculas. Por otro lado, se logró identificar la presencia de fenilalanina y lisina, aminoácidos de los cuales se encuentra enriquecido el ED de MARCKS en las monocapas conteniendo la proteína. Mediante BAM (Brewster Angle Microscopy) y microscopía óptica confocal se pudieron distinguir dominios enriquecidos en la proteína en la monocapa de mezcla DPPC-MARCKS. Conclusión: Mediante el empleo de plataformas activas SERS ha sido demostrado la identificación y posible localización del dominio efector de MARCKS en monocapas mezcla con DPPC, transferidas a estos sustratos. 1.- U. Dietrich, P. Kruger, T. Gutberlet, J. A. Kas. Biochimica et Biophysica Acta 1788 (2009) 1474-1481. 2.- K. Kneipp, H. Kneipp, I. Itzkan, R. R. Dasari, M. S. Feld. Journal of Physics: Condensed Matter. 14 (2002) R597-R624