Actividad sinérgica in vitro de benznidazol y clomipramina sobre Tripanosoma cruzi

STRAUSS, M; SILVA RODRIGUEZ, JH.; GARCÍA, MC.; LO PRESTI, S.; BAZÁN, P.; MILLER, N.; PAGLINI, P.; JIMENEZ KAIRUZ, AF.; NAKAMURA, C.; RIVAROLA, HW.

Rosario

Simposio; XXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología.; 2013

Sociedad Argentina de Protozoología.

Introducción La enfermedad de Chagas es una "enfermedad desatendida". Benznidazol(BZ) es el fármaco de elección; pero el acceso limitado, problemas fisicoquímicos y efectos adversos, condicionan su uso. Buscando nuevos blancos terapéuticos, la enzima tripanotiona reductasa exclusiva de Kinetoplastide, es una interesante alternativa y Clomipramina(CLO) es un inhibidor directo. Dada la no disponibilidad de BZ puro y CLO neutra, se obtuvieron y purificaron a partir de comprimidos disponibles y la sal (CLO.HCl), respectivamente Objetivo Evaluar la citotoxicidad y mecanismo del efecto combinado (BZ+CLO) sobre la cepa Y de T. cruzi, en epimastigotes(EPI) y trypomastigotes(TRY) Metodología Obtención de BZ: Se molieron comprimidos(Radanil®) y dispersaron en etanol(agitación/calor 30min). Se filtró y BZ se recristalizó por cambio de temperatura-solvente Obtención de CLO: Se obtuvo por neutralización de la solución acuosa de la sal con NaOH. Se purificó por partición con 1,2 dicloroetano y posterior evaporación lenta Ensayo de Citotoxicidad(MTT): Se aplicó la metodología Denizot(1986) sobre la línea celular LLCMK2. Se incubó 2,5.105cel/mL con BZ=62,5-1000µg/mL y CLO=25-1000µg/mL Efecto combinado (checkerboard): Se incubaron:a)EPI=1x106epi/ml con BZ=0,56-10µg/mL y CLO=6,25-100µg/mL,b)TRY=2x107tryp/ml con BZ=0,25-4,0µg/mL y CLO=0,975-31,25µg/mL. Se calculó el índice fraccional de concentración inhibitoria (FICI) y graficó el isobolograma Resultados Se obtuvo BZ (98% pureza) y CLO con rendimientos >85 y >70%, respectivamente. Ambos se presentaron como cristales aciculares, estables y poco higroscópicos. BZ+CLO mostraron un comportamiento antagónico en células LLCMK2(FICI=1,26). El IC50 de CLO+BZ fue 7 y 24 veces menor que la concentración citotóxica sobre EPI y TRY, respectivamente(FICIepi=0,90; FICItry=0,60) Conclusión La asociación CLO+BZ presenta efecto sinérgico sobre la cepa Y y puede ser considerada una potencial estrategia más efectiva y segura para la farmacoterapia del Chagas.