Naranjo Dulce Transgénico: búsqueda de resistencia al virus de la Psorosis de los cítricos mediada por proteína.

MARÍA C. ZANEK, CARINA A. REYES, EDUARDO J. PEÑA, MARÍA I. PLATA, NORMA COSTA, OSCAR GRAU, Y MARÍA L. GARCÍA

BUENOS AIRES

Congreso; REDBIO, 2005, Congreso Internacional, BAIRESBIOTEC2005.; 2005

Psorosis es una grave enfermedad que afecta cítricos en Argentina y Uruguay, se disemina por medio de un vector desconocido causando considerables pérdidas económicas. Ninguna especie cítrica conocida es tolerante a esta enfermedad. El agente causal, Citrus psorosis virus (CPsV), miembro tipo del género Ophiovirus , es multipartito y su genoma consta de al menos tres RNAs de polaridad negativa. El RNA 1 contiene dos marcos de lectura abiertos, los cuales codifican para una probable RNA polimerasa (280K) y para un polipéptido (24K) de función desconocida. El RNA 2 codifica un polipéptido de 54kDa de función desconocida y el RNA 3 expresa la proteína de la cápside viral (CP) de 48 kDa. Como objetivo de este proyecto nos propusimos obtener plantas transgénicas de naranjo Dulce tolerantes o resistentes a la Psorosis mediante expresión del gen de la cápside viral. Para ello, segmentos internodales de tallos jóvenes de Naranjo Dulce Pineapple, fueron transformados mediante inoculación con Agrobacterium tumefaciens (EHA105) conteniendo el gen CP de CPsV bajo el promotor 35S de CaMV (Cauliflower Mosaic Virus) clonado en el vector binario p35Sgusint. Los brotes regenerados fueron seleccionados por reacción histoquímica para GUS e injertados in vitro sobre un pie etiolado de Citrange Troyer (Citrus sinensis x Poncirus trifoliata). Posteriormente se realizó PCR de las plántulas crecidas in vitro para confirmar la presencia de los genes virales. Las plántulas que resultaron positivas se injertaron sobre un pie de Limóm Rugoso. Quince (15) líneas transgénicas fueron obtenidas, de las cuales 9 se evaluaron por Southern blot y TAS-ELISA. No se encontró correlación entre el número de copias del transgén y la expresión de dicha proteína. Se han iniciado experimentos de desafío de diferentes líneas para evaluar si han adquirido resistencia y/o tolerancia a Citrus psorosis virus.