ACEITES ESENCIALES QUÍMICAMENTE DIVERSIFICADOS CON HIDRACINA E HIDROXILAMINA: HACIA LA BÚSQUEDA DE NUEVOS ANTIMICOBACTERIANOS

CASALONGUE, MATÍAS; RAMALLO, I. AYELEN; GAGO, GABRIELA; GRAMAJO, HUGO; FURLAN, RICARDO L E

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Sociedad de Biología de Rosario; 2021

Sociedad de Biología de Rosario

La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa causada por bacterias del género Mycobacterium. El control de la TB se ha dificultado por la falta de una vacuna efectiva, de diagnósticos rápidos y fundamentalmente por la emergencia de cepas de M. tuberculosis resistentes a múltiples fármacos. Todo esto ha convertido a la TB en una de las diez principales causas de muerte. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de desarrollar medicamentos con nuevos mecanismos de acción que puedan reducir la duración y la complejidad de las terapias actuales. Los productos naturales (PN) contienen subestructuras bioactivas que han sido validadas evolutivamente por la Naturaleza para interaccionar con macromoléculas siendo excelentes puntos de partida para el diseño de fármacos. La diversificación química de extractos (DQE) explota la diversidad de esqueletos de PNs a través de la producción de nuevas moléculas semisintéticas bioactivas a través de reacciones estratégicas. El presente trabajo se centra en el diseño y preparación de mezclas semisintéticas por DQE mediante reacciones que incorporan farmacóforos nitrogenados en estructuras de PNs, y en el posterior estudio de sus propiedades antimicobacterianas. Para tal fin, se realizó la modificación de 26 aceites esenciales (AEs) con hidracina monohidrato e hidroxilamina clorhidrato en etanol a reflujo generando 52 AEs modificados (AEMs). Se efectuó la búsqueda de moléculas antimicobacterianas mediante ensayo en microplaca de 96 pocillos empleando la cepa modelo no patógena M. smegmatis, teniendo como referencia a isoniacida. Se probaron los AEMs por duplicado a 200 μg/mL (en DMSO) en un Middlebrook 7H9 suplementado con glicerol y tiloxapol. Luego de 48 h de incubación a 37 °C, se analizó el crecimiento celular agregando el indicador resazurina. El 62% de los AEMs ensayados no mostró crecimiento. Para seleccionar el mejor candidato para fraccionar cromatográficamente, dichos AEMs se analizaron por bioautografía de M. smegmatis a 100 μg/banda. La bioautografía es una herramienta que, al acoplar cromatografía en capa delgada con un ensayo biológico, permite adjudicar la bioactividad observada en la mezcla a los componentes responsables de la misma antes de ser purificados. A pesar del número de AEMs que mostraron capacidad antimicobacteriana, solo 13 AEMs mostraron halos de inhibición de crecimiento ausentes en los extractos de partida, de los cuales 8 resultaron de la reacción con hidracina. De todos ellos el mejor candidato es el AEM de Vetiveria zizanioides (L.) Nash diversificado con hidracina. El mismo presenta un halo de inhibición interesante con bordes definidos a un Rf de 0.08 en DCM:MeOH (97:3). En base a estos resultados se continuará con la purificación del compuesto activo mediante técnicas cromatográficas. Utilizando resonancia magnética nuclear y espectrometría de masa, se efectuará la identificación de la estructura activa, para finalmente arribar a estudios de cuantificación de la actividad biológica. Este trabajo demuestra el potencial de la DQE como generación de moléculas bioactivas, en especial de antimicobacterianos, satisfaciendo en parte la escasez de fuentes de quimiotipos novedosos para desarrollar drogas más eficientes.