Nuevo Método Autográfico para la Detección de Inhibidores de b-Glucosidasa

SALAZAR, MO; MICHELONI, O; OAKLEY, L; FURLAN, RLE

Rosario

Congreso; XXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2006

Sociedad de Biología de Rosario

Los extractos vegetales representan una fuente importante de nuevos compuestos con potencial terapéutico. Dado que éstos son mezclas complejas de compuestos químicos, un extracto con la actividad deseada representa el comienzo de un largo proceso de fraccionamiento que es más costoso que la preparación misma del extracto. Esto hace necesario el desarrollo de bioensayos sencillos que permitan adjudicar la actividad observada en una mezcla al/los componente/s responsable/s de la misma antes de ser separados, de manera de guiar el fraccionamiento. Una forma de lograr este objetivo es combinando un método separativo simple como la cromatografía en capa delgada (CCD) con un ensayo autográfico. Hasta el momento existen tres reportes de autografías sobre CCD para detectar inhibidores enzimáticos, dos utilizando a la enzima acetilcolinesterasa y uno utilizando a la enzima xantin-oxidasa. El presente trabajo tiene como objetivo el desarrollo de un método autográfico sobre CCD para detectar inhibidores de la enzima b-glucosidasa. Las glicosidasas son responsables de la hidrólisis de poli y oligosacáridos o de la ruptura de uniones heterosídicas y están involucradas en varios procesos biológicos importantes. Sus inhibidores son sujeto de gran interés debido a su potencial como drogas para el tratamiento de diabetes, cáncer, infecciones virales y enfermedades de almacenamiento lisosomal hereditarias. Para el desarrollo de la metodología se utilizaron placas cromatográficas con diferentes adsorbentes (silica gel, RP18, diol, ciano y celulosa) sembradas con conduritol b epóxido como control positivo. Para la detección de actividad enzimática se probaron diferentes sustratos precursores de productos coloreados (p-nitrofenil glucopiranosido y esculina). Los mejores resultados se obtuvieron cubriendo la placa cromatográfica con una capa de agar conteniendo enzima y FeCl3·6H2O, colocando posteriormente el sistema en contacto con una solución de esculina e incubando a 37°C por 2 horas. En estas condiciones la presencia del inhibidor se visualiza como un punto amarillo pálido en una matriz marrón oscuro. El ensayo descripto es rápido, sencillo y permite el análisis de varias muestras al mismo tiempo sin grandes requerimientos de equipamiento. Su utilidad es ilustrada a través del análisis de la presencia de inhibidores en 14 extractos de plantas