AUSENCIA DE INESTABILIDAD DE MICROSATÉLITES MONONUCLEOTÍDICOS EN PACIENTES CON LEUCEMIAS AGUDAS

NATALIA WEICH; MARCELA DE DIOS SOLER; IRENE B. LARRIPA; ARIELA F. FUNDIA

Buenos Aires

Jornada; XXVI JORNADAS NACIONALES DE ONCOLOGIA DEL INSTITUTO ÁNGEL H. ROFFO; 2010

INSTITUTO ÁNGEL H. ROFFO

Las leucemias agudas se caracterizan por presentar múltiples lesiones génicas, cuyo origen, si bien aún es desconocido, se asocia a la inestabilidad genómica. El objetivo del trabajo fue evaluar la inestabilidad de microsatélites (MSI) en leucemias agudas al diagnóstico mediante la genotipificación de microsatélites (STRs) mononucleotidicos BAT25 y BAT 26. Estos marcadores tienen una longitud cuasi-monomórfica en la población sana pero son altamente sensibles y específicos para diagnosticar MSI en tumores con mutaciones en los genes de reparación del mismatch (MMR). Se acepta que no requieren comparación con el ADN de línea germinal ya que se originan alelos nuevos por deleción de 4 a 15 pb en el ADN tumoral. BAT 25 (T25) esta ubicado en el intron 16 del encogen c-kit (4q) y BAT 26 (A26) en el intron 5 del gen MSH2 (2p). Dado que algunas poblaciones presentan variantes alélicas normales de menor tamaño, primero se estudiaron ambos marcadores en la población Argentina sana usando la línea HCT116 derivada de cáncer colorectal humano como control de MSI+. Se extrajo ADN de médula ósea en 15 pacientes de novo y de sangre periférica de 50 individuos normales con fenol/cloroformo. La amplificación se realizó en 25l con 1,5mM MgCl2, 100m dNTPs, 0,3/0,4M de cada primer, 1U de Taq polimerasa y 200ng de ADN genómico. La temperatura de annealing fue de 48ºC (BAT25) y 55ºC (BAT 26). La electroforesis se efectuó en geles de poliacrilamida nativos (15%) con tinción con nitrato de plata (0.1%). Se realizó la secuenciación manual de ambos microsatélites en 5 controles usando el sistema comercial fmol DNA sequencing System (Promega) y marcación isotópica (32P). En los controles se encontró poca variación en el tamaño de T25 (122 pb) y A26 (124 pb) confirmando su naturaleza monomórfica en la población Argentina normal y su utilidad para evaluar MSI sin comparar con el tejido normal. Mediante secuenciación se confirmó la estructura repetitiva de la secuencia poli (T) en BAT-25 y poli (A) en BAT 26. El análisis de los perfiles alélicos en el grupo de pacientes leucémicos no reveló la presencia de alelos inestables de menor tamaño. Estos resultados demuestran que los pacientes no presentan MSI sugiriendo que las mutaciones en los genes MMR no están involucradas en las leucemias agudas.