ANALISIS DE INESTABILIDAD DE MICROSATELITES EN ENFERMEDAD CELIACA

ARIELA FUNDIA; ALEJANDRA COTTLIAR; GRACIELA LA MOTTA; MARTÍN VIOLA; JUAN CARLOS GÓMEZ; IRMA SLAVUTSKY; IRENE LARRIPA

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas, XLIX Reunión Científica Anual de SAIC; 2004

SAIC, SAI, SAFE, SAB, SAN, SAF

ANALISIS DE INESTABILIDAD DE MICROSATELITES  EN ENFERMEDAD CELIACA. Ariela Fundia (1) ; Alejandra Cottliar (1) ; Graciela La Motta (2) ; Martín Viola (2) ; Juan Carlos Gómez (2) , Irma Slavutsky (1), Irene Larripa (1). (1) Depto. de Genética, Academia Nacional de Medicina, Bs. As. ; (2) HIGA ?Gral. San Martín?, La Plata. La mayoría de las neoplasias presentan algún tipo de inestabilidad genética ya sea cromosómica (CIN) o de microsatélites (MSI). La enfermedad celíaca (EC) es un desorden multifactorial que exhibe CIN y predisposición al desarrollo neoplásico. El objetivo del trabajo es establecer si la EC también tiene MSI causada por mutaciones en los genes de reparación del mismatch (MMR). Se estudiaron muestras apareadas de biopsias de intestino delgado y de sangre periférica (SP) de 10 pacientes al diagnóstico. La extracción de ADN se realizó con fenol:cloroformo: alcohol isoamílico (25:24:1) previa digestión con proteinasa K. Se seleccionaron 5 microsatélites: BAT25 y D18S58, D6S267, GSTP y TP53. Los microsatélites BAT25 y D18S58 se eligieron del panel de referencia de MSI para los tumores asociados a neoplasias colónicas; D6S267 coincide con un sitio de roturas cromosómicas común en EC (6q21); GSTP está ubicado en el gen GSTP de quimioresistencia y TP53 está incluido en el locus del supresor p53. La amplificación se efectuó por PCR touchdown en la que se disminuye la temperatura de annealing de 65 a 55°C. La PCR se efectuó en 25µl con 1,0mM Cl2Mg, 100µM dNTPs, 0,4-0,8µM primers, 1U de Taq polimerasa y 200ng de ADN. La electroforesis se realizó en geles de poliacrilamida no desnaturalizantes (17%) durante 8-10hs a 400 V coloreados con plata (0,1%). En general se detectó un bajo nivel de alteraciones de microsatélites, evidenciable por cambios en la longitud de las secuencias repetitivas. Un paciente presentó amplificación de un alelo de TP53 en la biopsia respecto de los alelos constitutivos de SP. Otros 2 casos presentaron pérdida de heterocigosis en TP53 y GSTP. Estos resultados sugieren que la EC es una entidad caracterizada por CIN y no asociada a MSI ni a un sistema MMR defectuoso. El hallazgo de 2/10 casos (20%) con alteraciones en el microsatélite TP53 sugeriría la existencia de pacientes que podrían presentar mutaciones en este gen supresor de tumor.