EVIDENCIAS CITOLOGICAS, INMUNOLOGICAS Y ULTRAESTRUCTURALES DE LA ACCION DE LA HCG

FORNES MW.; VINCENTI AE.; BURGOS MH.

San Luis

Congreso; XV Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 1997

SBCUYO

La inyección de HCG en el saco linfático dorsal del Bufo arenarum produce la espermiación comprobada por la aparición de espermatozoides en la cloaca por un mecanismo aún en estudio. La célula blanco de la HCG parece ser la célula de Sertoli (CS). Esta sufre extensos cambios ultraestructurales con ?liberación2 (espermiación) de gametas luego de la inyección de HCG in vivo. Actualmente, estudiamos en CS aisladas de testículos de sapos machos adultos en ciclo reproductivo activo en contacto con 200 UI de HCG en el medio de Holtfreter (grs/100 ml: 0.35 NaCl, 0.005 KCl, 0.01 CaCl2, 0.02 NaCOH) buscando evidencias directas de la acción de HCG evitando la probable acción en el sistema nervioso central. Para ello se extrae la gónada de sapos demedulados, se secciona en pequeñas partes y se sumerge en Holtfreter con 1% colagenasa por 15 min a temperatura ambiente. Esta suspensión se filtra por gasa y se centrifuga 350 por 1 minen 3 oportunidades eliminando la mayor parte delos espermatozoides. El pellet se resuspende, verifica la vitalidad (eosina 0.5% eosina en Holtfreter) y divide en 2 alicuotas iguales, control y experimental y experimental. La experimental se incuba con HCG y cuantifica el número de CS ?vacuoladas? y sin espermatozoides en relación al total de CS en MO con campo claro a 200X. En frotis de esta suspensión se realizó inmunodetección de HCG con un anticuerpo policlonal ante HCG (1/40, Sigma) y un2 o anti IgG en conejo (1/100, Sigma) con peroxidasa y revelado por un kit para peroxidasa (Sigma). En experimentos in vivo se inyectaron sapos de iguales características a los anteriores con HCG unida a oro coloidal y los testículos se procesaron de forma convencional para ME. Las CS se mostraron vacuoladas y sin espermatozoides en el 56% pero en los controles no supera, el 10%. Las células vacuoladas se tiñeron de marrón intenso indicando la presencia de HCGen su superficie a diferencia de los controles. En SE ME vacuolización, persistencia de los microtúbulos y liberación de espermatozoides. Además, el oro coloidal se localizó en vesículas distribuidas en el interior de las CS. Estos resultados evidencian que la célula de Sertoli sufre la espermiación por la acción directa de la HCG in vivo e in vitro, evidenciada por vacuolización y liberación de espermatozoides, con localización de la HCG en la superficie de la célula de Sertoli y en vacuolas intracelulares.