INDUCCION DE LA REACCION ACROSOMAL EN ESPERMATOZOIDES DE RATON. PUESTA A PUNTO DE UNA EFICAZ METODOLOGIA DE ESTUDIO

PIETROBON EO.; DOMINGUEZ L.; BELMONTE SA.; BURGOS MH.; FORNES MW.

San Luis

Congreso; XV Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 1997

SBCUYO

Introducción: La reacción acrosomal (RA) es la exocitosis regulada que permite la liberación de enzimas contenidas por el acrosoma espermático. Esto permite la penetración del espermatozoide al ovocito durante la fertilización. La regulación de la RA en espermatozoides humanos es mediada por la activación de proteínas que ligan GTP (proteínas G) y la consecuente activación de fosfolipasa A2 en presencia de Ca++ (Dominguez y col., 1995; 1996; 1997). La RA se produce en respuesta a estimulantes fisiológicos (zona pellúcida y progesterona) o químicos (gtp) s, lonóforos) luego de un período de incubación en un medio de cultivo. Es nuestra intención poder validar en otros espermatozoides de mamíferos el modelo de promoción de la RA propuesto en trabajos previos; páralo cual pondremos a punto una metodología de estudio de RA en espermatozoides de ratón. Material y Métodos: Durante la RA se produce la liberación de enzimas acrosomales como la fosfatasa ácida que se puede determinar por un método fluorométrico como se describió en trabajos previos en espermatozoides permeabilizados de ratón (Díaz y col, 1996). Se usa 4 metil umbeliferil fosfato (30 mg/ml en buffer acetato 50 mM-pH 4.5) como substrato para ensayar la actividad tanto en el sobrenadante y pellet de espermatozoides tratados con 1% de Triton X100 como en el medio de cultivo de los mismos. Resultados: Los espermatozoides incubados durante 90 min en un medio de cultivo Ham F-10 (Sigma) liberan por reacción acrosomal espontánea un 40% de la actividad total mientras que en presencia de 20 uM de Ionóforo de Ca++ (23187, Sigma) liberaron 62% de la actividad total. Esto se correlaciona con la actividad extraída por Triton X100 en tanto que la actividad insoluble se mantuvo constante. Conclusiones: Los resultados preliminares indican que el método es sensible a los niveles de fosfatasa ácida presente en el medio de cultivo a consecuencia de la RA, espontánea o inducida por Ionóforo.