ACCION DE LA HCG EN LAS CELULAS DE SERTOLI DEL TESTICULO DE Bufo arenarum

FORNES MW.; VINCENTI AE.; BURGOS MH.

Mendoza

Jornada; III Jornadas de Investigación de la Facultad de Ciencias Médicas, UNCuyo; 1997

Facultad de Ciencias Médicas. UNCuyo

La inyección de HCG en el saco linfático dorsal del Bufo arenarum produce la espermiación comprobada por la aparición de espermatozoides en la cloaca por un mecanismo aún en estudio. La célula blanco de la HCG parece ser la célula de Sertoli (CS). Esta sufre extensos cambios ultraestructurales con ?liberación? (espermiación) de gametas luego de la inyección de HCG in vivo. Actualmente, estudiamos en CS aisladas de testículos de sapos machos adultos en ciclo reproductivo activo en contacto con 200 UI de HCG en el medio de Holtfreter (grs./100 ml: 0.35 NaCl, 0.005 KCl, 0.01 CaCl2, 0.02 NaCOH) buscando evidencias directas de la acción de HCG evitando laprobable acción en el sistema nervioso central. Para ello se extrae la gónada de sapos demedulados, se secciona en pequeñas partes y se sumerge en Holtfreter con 1% colagenasa por 15 min a temp ambiente. Esta suspensión se filtra por gasa y se centrifuga 350 por 1 min en 3 oportunidades eliminando la mayor parte de los espermatozoides. El pellet se resuspende, verifica la vitalidad (eosina B 0.5% en Holtfreter) y divide en2alicuotas iguales, control y experimental. La experimental se incuba con HCG y cuantifica en microscopía óptica (campo claro, 200X) el número de CS ?vacuoladas? y sin espermatozoides en relación al total de CS. En frotis de esta suspensión se realizó inmunodetección de HCG con un anticuerpo policlonal anti HCG (1/40, Sigma) y un 2º.anti IgG en conejo (1/100, Sigma) con peroxidasa y revelado por un kit para peroxidasa (Sigma). Las CS se mostraron vacuoladas y sin espermatozoides en el 56%, pero en los controles no superó el 10%. Las células vacuoladas se tiñeron de marrón intenso indicando la presencia de HCG en su superficie a diferencia de los controles. Las CS, control y experimental se procesaron para microscopía electrónica mostrando la vacuolización, persistencia de los microtúbulos y liberación de espermatozoides en los experimentales y no en los controles. Estos resultados evidencian que la célula de Sertoli posee receptores en la superficie para la HCG tanto in vivo como in vitro, evidenciada por vacuolización y liberación de espermatozoides, con localización de la HCG en la superficie de la célula de Sertoli y en vacuolas intracelulares.