INVESTIGADORES
FORNES Miguel Walter
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DE FOSFORILACIÓN EN TIROSINADE PROTEINAS DE ESPERMATOZOIDES HUMANOS DURANTE LA CAPACITACION
Autor/es:
MONCLUS MA.; ORTEGA S.; MARTINEZ A.; BURGOS MH.; FORNES MW.
Lugar:
Mendoza
Reunión:
Congreso; XVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 2000
Institución organizadora:
SBCUYO
Resumen:
Introducción: La capacitación espermática prepara al espermatozoide (Es) para fertilizar al ovocito y tiene alta correlación con la fosforilación de proteínas en tirosina (p-Y) en varias especies. En Es humanos hay pocos estudios y menos aún sobre el uso como screening de patología en infertilidad masculina. Métodos: Muestras de semen en estudio por posible factor masculino y muestras normales fueron sometidas a incubación para capacitarlas. Se colocaron alícuotas de semen en el fondo de un tubo y un volumen igual de medio HamF10 (Sigma) ?suplementado con BSA- (3mg/ml) y bicarbonato (10 mM) ?sobre la capa seminal durante 3 h en incubadora con control de CO2 5% en aire. En los últimos 15 min se adicionó o no (control) IBMX (xantina inhibidora de fosfodiesterasa, 100 uM) y dbAMPc (análogo sintético de AMPc no hidrolizable, 1 mM) ambos incrementadores de p-Y. El sobrenadante (HamF10) contiene los Es mótiles y capacitados (C). También se obtuvo del semen otra alícuota inicial para extraer proteínas de Es sin capacitar (NC). Las proteínas extraídas se corrieron según Laemmli (1970). Luego se realizó un blot con método estándar (Towbin, 1979). El immunoreconocimiento de p-Y en proteínas se realizó según Visconti y col. (1995 a y b). Resultados: En los inmunoblots se reconocieron bandas entre 40 y 110 kDa que tienen p-Y en muestras provenientes de Es C. En tanto, los NC sólo mostraron p-Y en 2 bandas (95 y 110 kDa). El uso de IBMX + dbAMPc anticipó e incrementó la señal. En algunas muestras de Es provenientes de pacientes se observó una alteración del patrón de bandas p-Y. Discusión: El uso de los estimulantes de p-Y nos permitió acortar los tiempos de incubación y tener una señal comparable a la de tiempos de incubación mayores lo que lo acerca al laboratorio clínico. Las alteraciones del patrón de bandas p-Y en pacientes en estudio nos podrían indicar que estos tienen menos posibilidades de capacitarse y por ello no fertilizar al ovocito.