CORRELACION ENTRE FIV Y ALTERACIONES DE UN MARCADOR DE CAPACITACION ESPERMATICA, LA FOSFORILACION EN TIROSINA

MONCLUS MA.; VINCENTI AE.; ORTEGA S.; MARTINE A.; BURGOS MH.; FORNES MW.

Mendoza

Jornada; VII Jornadas de Investigación de la FCM-UNCuyo; 2002

Facultad de Ciencias Médicas. UNCuyo

Introducción: La capacitación espermática involucra una serie de cambios funcionales que habilitan a la gameta para fertilizar al ovocito. Un marcador de ellos es la fosforilación de proteínas en tirosina (p-Y) que se observa claramente al comparar los patrones de bandas de proteínas de un blot provenientes de espermatozoides no capacitados (sin incubar en condiciones capacitantes) versus los capacitados (incubaciones mayores a 6 hs o con estimulantes de Adenilato Ciclasa). A su vez, la búsqueda de un marcador de capacidad fertilizante de una muestra sería de gran utilidad para predecir el resultado de una fertilización in vitro (FIV). Como control se podría utilizar una situación natural que es la astenozoospermia que tiene bajo porcentaje de éxito y que de tener alteraciones de la p-Y nos ayudaría en la definición de este parámetro ? p-Y ? como marcador de fertilidad. Métodos: Se estudiaron muestras de espermatozoides normales, con diferentes anomalías seminales y astenozospermias. Luego de la determinación de los parámetros básicos el resto de espermatozoides fueron lavados y mantenidos en condiciones capacitantes por tiempos variables (entre 0 min ?control- y 12 hs). Luego de la incubación fueron lavados con PBS (0.02 mM, pH 7.4), se les extrajeron proteínas, las que se corrieron en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE 12%; Laemmli, 1978). Luego se realizaron los inmuno blots siguiendo el método descripto por Kalab (1991) utilizando un Ac anti p-Y (p-Y 20, UBI) y un kit de revelado Sigma (Extravidin, Sigma). La FIV se llevó a cabo según el protocolo de uso habitual en Clínica. Los pacientes con parámetros seminales normales mostraron patrones de bandas en los inmunoblots variables. Estas variaciones fueron desde un incremento en el número de bandas fosforiladas (patrón esperable), disminución del número de bandas e inversión (alto número al inicio de la incubación y disminución durante la incubación). Los blots correspondientes a astenozoospermias mostraron iguales situaciones. La correlación con la FIV ?positiva o negativa- no arrojó aún un valor significativo. Los resultados nos mostraron patrones muy variables, lo que dificulta más la comparación con la FIV y el número de estas es aún bajo para poder obtener conclusiones.