ESTUDIO DE MICRODOMINIOS DE MEMBRANA (RAFT) EN LA GAMETA MASCULINA DURANTE LA MADURACION, CAPACITACION Y FERTILIZACION

BOARELLI P V.; MONCLUS M A.; VINCENTI AE.; FORNES MW.

San Miguel de Tucumán, Tucumán

Jornada; 1a Jornadas Nacionales de Cátedras de Histología; 2004

Facultad de Ciencias Naturales e Instituto Miguel Lillo, UNT

El estudio de microdominios (MD) lipídicos en la membrana plasmática ha despertado gran interés en los últimos años. Las funciones de estos MD son diversas. Una de ellas es la transducción de señales (TdS). La gameta masculina no está ajena a este tipo de fenómeno. De antecedentes sobre MD en otros tipos celulares surge el estudio de los mismos en la gameta masculina. Nuestro estudio está orientado a la caracterización y relación de los MD con las funciones específicas en este tipo de células. La maduración y capacitación involucra un mecanismo original de TdS donde el colesterol (C) de la membrana cumple un rol importante. Este C se asocia a glicolípidos y proteínas constituyendo un MD. Uno de nuestros objetivos es co-localizar los tres componentes principales de los MD: colesterol, esfingolípidos (GM1) y proteína asociada (caveolina 1); mediante marcación específica con filipinIII (FIII), subunidad beta de toxina colérica (TC) y Ac anti-cav1, respectivamente. Espermatozoides (E) sin capacitar (control) y capacitados in vitro en presencia de albúmina (BSA) y bicarbonato (experimental) fueron tratados con los marcadores específicos y posteriormente analizados por microscopía de fluorescencia. En el caso de caveolina 1 primeramente fueron permeabilizados con estreptolisina O, luego tratados con Ac anti-cav1 y revelado con un segundo anticuerpo. FIII se localiza en la zona acrosomal excepto en E capacitados, donde solo se observa marca en la gota citoplásmica. TC se observa marcando el GM1 en la zona postacrosomal luego de la capacitación (redistribución). Cav1 se localiza en la zona acrosomal de E maduros y no capacitados. En resultados preliminares se observó GM1 y Cav1 a nivel postacrosomal, siendo zona de unión entre los ovocitos y los E durante la fertilización. Para analizar el rol de los MD en la fertilización se realizaron ensayos de inhibición incubando los E con los marcadores específicos (FIII y TC) y posteriormente ensayos de fertilización (FIV). Los resultados hasta el momento sugieren que los componentes al redistribuirse tras la capacitación bloquearían la FIV, aunque estadísticamente no fue significativo.