Potencial biotecnológico de hongos filamentosos productores de tirosinasas aislados de Las Yungas tucumanas para la producción de L-Dopa

PERALTA MP; LECHNER BE; FARIÑA JI

Lima

Congreso; IX Congreso Latinoamericano de Micología; 2017

Asociación Latinoamericana de Micología

La enzima tirosinasa, (TYR) EC 1.14.18.1, se encuentra ampliamente distribuida en toda la escala filogenética. En este trabajo, nos hemos centrado en su producción utilizando hongos filamentosos nativos de Las Yungas tucumanas. Esta ecorregión es un área prioritaria para la conservación, y por tal motivo, esta investigación pretende contribuir a la valoración de la misma, haciendo hincapié en el descubrimiento de hongos filamentosos con potencial para la producción de TYR y L-Dopa (L-3,4 dihidroxifenilalanina), esta última, producto de la biotransformación de L-tirosina por acción de lasTYRs. Para seleccionar organismos hiperproductores, se llevó a cabo un screening a partir de 40 ejemplares de la micoteca de Las Yungas (Lab. Micodiversidad y Micoprospección, PROIMI-CONICET), que habían sido pre-seleccionados mediante un método cualitativo como productores de TYRs. Para evaluar la producción de TYRs de forma cuantitativa, dichos aislamientos fueron crecidos en dos medios de producción: 1) no inductor, Czapek-Dox Agar (CDA), para determinar la producción TYRs basales y, 2) inductor, Czapek-Dox Agar Enriquecido (ECA), de igual composición al CDA pero suplementado con CuSO4·5H2O (0,004% p/v) y L-tirosina (2% p/v). Para cada condición de cultivo se obtuvieron dos extractos crudos: 1) un lisado celular resultante de la homogeneización con el disruptor celular BeadBeater y 2), un exudado obtenido mediante dos etapas de congelamiento-descongelamiento. Con ambos se llevó a cabo la determinación cuantitativa de las actividades monofenolasa y difenolasa de la enzima tirosinasa, mediante el método del Dopacromo, utilizando como intermediario MBTH (5 mM), CuSO4 (0,04mM) como cofactor, y L-Tyr (8 mM) o L-DOPA (8 mM) como sustratos, según la actividad cuantificada (mono- o difenolasa). Del total de hongos evaluados, se seleccionaron 8 aislamientos como hiperproductores de TYRs, los que fueron comparados posteriormente según su capacidad para sintetizar L-Dopa en cultivo sumergido y bajo condiciones operativas controladas. Acorde a lo ensayado, el aislamiento LY 38.7 fue el más promisorio, teniendo en cuenta los títulos de L-Dopa (178,84 mg/L al cabo de 96 h) y los valores de actividad TYR monofenolasa y difenolasa (21,36 UE/L y 23,37 UE/L, respectivamente, al cabo de 96 h).