Cuantificación de la actividad enzimática y amplificación de fragmentos génicos de lacasa y manganeso peroxidasa en Peniophora sp.

FONSECA MI; MR TEJERINA; AB RAMOS; NI SANABRIA; JI FARIÑA; LL VILLALBA; PD ZAPATA

S.M. Tucumán

Congreso; XXXVIII Congreso Argentino de Genética; 2009

Sociedad Argentina de Genética

Los hongos de pudrición blanca presentan un amplio espectro de enzimas como lacasa (Lac) y manganeso peroxidasas (MnP), con aprovechamiento biotecnológico en procesos como el biopulpado, bioblanqueo y biorremediación. El objetivo del trabajo fue cuantificar esta actividad enzimática y obtener un fragmento de los genes de lac y mnp del hongo de pudrición blanca Peniophora sp. Para ello Peniophora sp. fue cultivado en medio líquido (extracto de malta 12,7 g/L - extracto soluble de maíz 5 g/L, pH 3,5) por 7, 10 y 14 días en condiciones estáticas. La actividad enzimática lacasa se determinó por espectrofotometría a 459 nm usando como sustrato 2,6–dimetoxifenol 5 mM en buffer acetato de sodio 0,1 M (pH 3,6) y la MnP a 610 nm usando rojo fenol 0,1 M en buffer succinato 0,1 M (pH 4,5). El análisis estadístico fue realizado mediante el programa GraphPad Prism 4. Para la amplificación por PCR se extrajo DNA de micelio. No se observó diferencias significativas (P > 0.05) en la actividad enzimática entre los distintos días. La actividad lacasa fue de 60 U/L y la de MnP de 45 U/L. Por otro lado se obtuvieron amplicones de 200 y 300 pb para la Lac y MnP respectivamente que fueron secuenciados. El análisis bioinformático mediante megablast mostró una identidad de 83% para lac y de 96% para mnp con otros hongos de pudrición blanca. Las secuencias génicas son fundamentales para analizar la regulación a nivel genético de éstas enzimas y evaluar posibles inductores para incrementar la producción.