LEUCOSIS ENZOÓTICA BOVINA: ESTUDIO PRELIMINAR DE ANIMALES SEROPOSITIVOS MEDIANTE EL ANÁLISIS DEL GEN DE CLASE II DEL MHC BOVINO DRB3 POR PCR-RFLP

PANEI CJ; METZ GE; DIAZ S; GIOVAMBATTISTA G; ECHEVERRÍA MG; GONZALEZ ET

Valle Hermoso, Cordoba, Argentina

Jornada; XXVI REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA; 2006

Sociedad Argentina de Virologia

La Leucosis Enzoótica Bovina (LEB) es una enfermedad linfoproliferativa asociada a pérdidas económicas significativas. En nuestro país se ha observado un notable incremento de su prevalencia a partir de 1990 sobre todo en bovinos de tambo. SENASA estableció a partir de 1994 planes de control y erradicación de esta enfermedad crónica caracterizada por un largo período de latencia y gran potencial de transmisibilidad. El virus se integra como provirus en los linfocitos “B” y por lo tanto los animales se mantienen portadores de por vida desarrollando linfocitosis persistente (30%) o desarrollan tumores muy agresivos (0,1-5%). Si bien la transmisión horizontal y vertical son muy importantes, la transmisión iatrogénica es considerada una de las principales formas de contagio. No existen vacunas para prevenir la infección y su control por lo tanto debe estar concentrado en la prevención. Teniendo en cuenta que los anticuerpos coexisten con el estado de portador de virus, las pruebas serológicas son los procedimientos más prácticos para su diagnóstico como la dobleinmunodifusión en agar (DIDA), de fácil realización y relativo bajo costo y aceptada por SENASA. Hasta la fecha permanecen incompletos los conocimientos sobre el mecanismo celular por el cual el virus induce cambios proliferativos sobre linfocitos B dando lugar a linfocitosis y/o linfosarcoma en el bovino. Teniendo en cuenta que todos los bovinos, independientemente de su raza o edad, son igualmente susceptibles a la infección, la evolución posterior a la forma tumoral estaría condicionada por circunstancias particulares de la interacción virus-hospedador. Esta susceptibilidad estaría determinada por factores genéticos, especialmente relacionados a la presencia de haplotipos del Complejo Principal de Histocompatibilidad bovino (BoLA) que condicionarían la resistencia o susceptibilidad a la enfermedad. Entre los genes de clase II del BoLA el gen funcional BoLA-DRB3 es muy polimórfico, y mostró la mayor asociación con susceptibilidad a linfocitosis en estudios previos. En este trabajo, como primera etapa se estandarizó la técnica de PCR-RFLP del locus DRB3 utilizando DNA total de bovinos seropositivos a leucosis. Se analizó un total de 13 muestras de animales Holando Argentino, 12 provenientes de un tambo de la Provincia de Córdoba y una muestra de Santa Catalina, perteneciente a la FCV-UNLP. Los animales sin sintomatología clínica aparente se determinaron como seropositivos por inmunodifusión, con determinación de linfocitosis en 8 de ellos (conteo de linfocitos circulantes). El DNA genómico total se extrajo a partir de sangre entera mediante kits comerciales (Promega). Para amplificar el exón 2 del gen DRB3 se realizó PCR “heminested”, con los primers HL030 y HL031 y una segunda ronda de amplificación con los primers HL030 y HL032. Los productos de PCR se purificaron y digirieron con las enzimas de restricción RsaI, BstY y HaeIII a fin de definir el genotipo DRB3 en cada animal. Los productos de PCR digeridos se sembraron en geles de poliacrilamida y se visualizaron con tinción con “Sybr Gold”. Se identificaron los genotipos presentes en los animales analizados, y dos animales con linfocitosis fuertemente elevada, presentaron el alelo BoLA–DRB3.2*16.Conclusión. La presencia de alelos con mayor incidencia en el grupo de animales susceptibles detectada en este estudio coincide con los resultados reportados en estudios previos en otras poblaciones bovinas de otras regiones geográficas.