Sobre la regulación redox de la actividad de la enzima UDP-glucosa pirofosforilasa en Entamoeba histolytica.

MARTINEZ L; GUERRERO S.; IGLESIAS A.A,

Santa Fe

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2009

Sociedad Argentina de Protozoología

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-AR;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Amebiosis es una infección intestinal causada por el patógeno humano Entamoeba histolytica. La enfermedad causada por este agente es la tercera causa de muerte en el mundo (100.000 muertes anuales). E. histolytica presenta gliconconjugados anclados a la superficie celular, los cuales estarían involucrados en las interacciones entre el parásito y el huésped. La ruta biosintética para estos glicoconjugados aún no ha sido completamente elucidada. En este tipo de organismos la producción de oligo y polisacáridos estructurales ocurre vía UDPGlc, siendo la enzima UDPGlc pirofosforilasa (EC 2.7.7.9; UDPGlcPPase) responsable de su síntesis. Aquí reportamos el clonado molecular del gen que codifica para la UDPGlcPPasa de E. histolytica. Se utilizó el sistema E. coli BL21(DE3)/pRSETB para la expresión y purificación de la proteína recombinante (EhUDPGlcPPasa). La enzima purificada se caracterizó cinéticamente en ambos sentidos de reacción. Oxidantes como diamida, peróxido de hidrógeno y nitroprusiato de sodio inactivan a la enzima. El proceso se revierte completamente con agentes reductores como cisteína, DTT y TRXs. Con la ayuda de un modelo computacional de la enzima se identificaron determinados residuos de cisteína y metionina críticos para la regulación redox. En base a esos datos se produjeron las mutantes C108S, C378S, C108/378S, M106S y M106C, cuya caracterización alude un mecanismo para la regulación de la enzima. Se sugiere que la EhUDPGlcPPasa es una enzima regulada por un mecanismo de modificación postraduccional de tipo redox que modula sus niveles de actividad. Este mecanismo podría afectar críticamente al metabolismo de carbohidratos en este organismo. Trabajo subsidiado por: CAI+D 2006, PICT´07 668 y PICTO’05 15-36129.