Análisis de la vía TGFbeta/smads como parte de la respuesta de daño al ADN (RDA) producido por BNCT en células tumorales de colon

NIEVAS S; ROSSICH L; RODRIGUEZ C; CARPANO M,; CUROTTO P; THORP S; PISAREV M; JUVENAL G; DAGROSA MA

Buenos Aires

Congreso; XLV Reunión Anual de la Asociación Argentina de Tecnología Nuclear (AATN); 2018

Introducción: El campo de radiación producido en el tumor durante la aplicación de BNCT es una mezcla de componentes de diferentes LET que activan la respuesta de daño al ADN (RDA), incluida la reparación de rotura de doble cadena (DSB) y la muerte celular por catástrofe mitótica o apoptosis. Es bien conocido el papel del TGF beta1 en el control del crecimiento homeostático; sin embargo, ha sido menos estudiado su papel en la regulación de la respuestas al estrés genotóxico a través de los factores de transcripción Smad. El objetivo de estos estudios fue analizar la vía de señalización TGF beta/Smad como parte de la RDA producida por BNCT y el crosstalk entre miembros de las diferentes vías. Materiales y Métodos: Se sembraron células de cáncer de colon humano (HT29) en botellas de 25 cm2 para ser irradiadas en fase exponencial de crecimiento. A continuación las células se distribuyeron en 4 grupos: 1) Control; 2) BNCT (BPA + neutrones); 3) NCT (neutrones solos) y 4) Efecto Bystander de BNCT. Se usó BPA en una concentración de 0.925 mM (10 ppm 10B) y se llevó a cabo la irradiación en el reactor RA3 (Flujo de neutrones de 1.1010 n / cm2 seg) para obtener una Dosis Física Total de 3 Gy. Después de la irradiación, las células se incubaron durante 1,5 horas en estufa a 37 ° C. Para estudiar el ARNm de TGF beta1, Smad2 Smad7 y ATM, se extrajo el ARN total con Trizol y se realizó una RT-PCR en tiempo real para cada gen. Resultados: La expresión de TGF beta1 y de Smad7 aumento en todos los grupos irradiados respecto al Control (p˂0.05). Por otro lado, la expresión de Smad 2 mostro una tendencia a disminuir en los tres grupos irradiados. El ARNm de ATM disminuyo en todos los grupos tratados comparados con el Control (p˂0.001). El grupo irradiado de manera indirecta (Bystander) se comportó de manera similar al grupo NCT. Conclusiones: El aumento en la expresión de TGF beta y Smad7 por un lado, y la disminución de Smad2 en el otro, para todos los grupos irradiados, sería consistente con la disminución en la sobrevida celular observada previamente. El aumento de la expresión de Smad7 actuaría inhibiendo esta vía a través del bloqueo de Smad2 y, por lo tanto, aumentando la inestabilidad genética, lo que conduciría a un mayor número de aberraciones cromosómicas y muerte celular. La disminución observada en la expresión de ATM podría corresponderse con un aumento en la expresión de ATR que mediaría la respuesta de daño de doble cadena (RDA). La descripción de los mecanismos activados permitirá diseñar estrategias de manipulación de la respuesta celular con una potencial traslación a la clínica.