Estudios in vitro para la optimización individual de la terapia por captura neutrónica en boro (BNCT) en el tratamiento del melanoma cutáneo.

CARPANO, M; DAGROSA, MA; NIEVAS, S; ROSSINI, A E; JUVENAL, GJ; PISAREV, MA.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXXVI Reunión Anual de la Asociación Argentina de Tecnología Nuclear.; 2009

Asociación Argentina de Tecnología Nuclear

Introducción: El melanoma es un tumor agresivo que si es diagnosticado de manera precoz es bien controlado con los tratamientos convencionales; sin embargo en su forma avanzada este tumor no responde a ninguna de las terapias usualmente utilizadas. Desde sus inicios en los años 50, la terapia por captura neutrónica en boro (BNCT) ha sido estudiada para el tratamiento de esta enfermedad. BNCT consiste en la captación selectiva de boro-10 por el tumor y la posterior irradiación del mismo con neutrones térmicos, para producir una partícula alfa y un núcleo de litio-7, dos partículas de alta transmisión lineal de energía (LET) y muy letales. Actualmente diferentes países, incluida la Argentina, han desarrollado ensayos clínicos utilizando el aminoácido borofenilalanina (BPA). Si bien en muchos casos se ha logrado la remisión completa del tumor y en otros se ha controlado la enfermedad prolongando la sobrevida de los pacientes, se observan resultados muy diversos. Esta variación individual observada para un mismo diagnóstico histopatológico y para la misma aplicación de BNCT, ha sido descripta anteriormente para la radioterapia convencional. Objetivo: El principal objetivo de este trabajo fue estudiar y comparar la captación de BPA en función del tiempo en 3 líneas celulares humanas de melanoma. Como objetivo secundario se planteó analizar el efecto en la captación de BPA del AMPc factor bioquímico que normalmente regula la función celular. Materiales y Métodos: Las 3 líneas celulares de melanoma (MELJ, M8 y A375) fueron cultivadas en su medio correspondiente (RPMI en las dos primeras líneas y DMEM/F12 en A375), suplementadas con 10% de suero fetal bovino (SFB). A células en crecimiento sembradas en placas de 100 mm2 se les agregó BPA 0.14 M en una concentración de 50 µg boro-10/mL por diferentes periodos de tiempo: 1, 2, 4 y 24 hr. A continuación las células fueron despegadas con tripsina-EDTA 1X, contadas utilizando tripan blue y digeridas con una solución de nítrico: sulfúrico (1:1). La concentración intracelular de boro fue medida por el método de ICP-AES. Para los estudios de captación en presencia de AMPc, éste fue agregado en una concentración de 0.1 mM. Resultados: Las curvas de captación de boro en función del tiempo fueron distintas para las 3 líneas celulares, mostrando un pico a las 2 hs para MELJ y a las 4 hr para A375 y M8. A las 24 hr, tiempo en el cual se observa una especie de saturación para MELJ y A375, y una disminución en la concentración boro para M8 los valores fueron de 0.129 ± 0.0023 (MELJ); 0.112 ± 0.0054 (A375) y 0.041 ± 0.00464µg boro/106 cels (M8).  A este tiempo la relación en la captación de boro fue MELJ/M8: 3.14 y A375/M8: 2.73. Por otro lado los estudios del efecto de AMPc sobre la captación del BPA realizados a distintos tiempos, mostraron que la captación en presencia de AMPc aumenta significativamente (p<0.05) a 1 y 2 hr, sin embargo este efecto se revierte a las 24 hr. Conclusiones: Las 3 líneas de melanoma mostraron diferentes patrones de captación para el BPA, siendo significativamente mayor en dos de ellas (MELJ y A375 Vs. M8). Por otro lado se comprobó que el AMPc regularía la función de captación de BPA en las células tumorales a la hora y a las 2 horas. A las 24 hr la reversión observada de este efecto, podría deberse a la degradación intracelular del AMPc. Estos resultados preliminares sugieren un nuevo enfoque de aplicación de BNCT basado en las características específicas y particulares de cada tumor.