INHIBICIÓN DE LA REPARACIÓN EN COMBINACIÓN CON BNCT EN UN CARCINOMA DE TIROIDES.

RODRIGUEZ C; CARPANO M,; CUROTTO P; THORP S; JUVENAL G; PISAREV M; DAGROSA A

Buenos Aires

Jornada; XXXI Jornadas de Oncologia del Instituto Roffo; 2016

Instituto Roffo, Universidad de Buenos Aires

Introducción y antecedentes: La terapia por captura neutrónica en boro (BNCT) está basada en la reacción 10B (n,) 7Li y ha sido propuesta para el tratamiento de tumores que no responden a terapias convencionales. El carcinoma pobremente diferenciado de tiroides pierde la capacidad de captar iodo y no responde al tratamiento con iodo radiactivo. Previamente determinamos que luego del tratamiento con BNCT la vía de reparación de lesiones doble cadena (DSB) en el ADN por recombinación homóloga (HR) se activa mientras que la de unión de extremos no homólogos (NHEJ) no. Detectamos que los niveles de ARNm de la enzima Rad51, correspondiente a la vía HR aumentan en respuesta al tratamiento y que dicho aumento se corresponde con una reparación del daño en el ADN luego de 24 horas desde el momento de la irradiación. Estos resultados indican que existe una respuesta específica inducida por BNCT que provoca una disminución en el efecto de la terapia. En este contexto y con el fin de disminuir la recurrencia del tumor utilizamos el inhibidor específico de la enzima Rad51, B02 [(E)-3-benzyl-2-(2-(pyridin-3-yl) vinyl) quinazolin-4(3H)-one], que inhibe específicamente la actividad de Rad51 disminuyendo así la sobrevida celular en respuesta a diferentes tratamientos. Aun no se han probados su efectos en combinación con BNCT. Objetivo: determinar si la combinación de B02 con BNCT disminuye la sobrevida y el daño que produce localmente en células de carcinoma folicular de tiroides más que el tratamiento solo con BNCT. Materiales y métodos: se determinó la concentración y el tiempo a los cuales B02 no tiene efectos por sí solo en células de la línea de carcinoma folicular de tiroides (WRO) por medición de proteínas totales. Se midió la sobrevida luego de los distintos tratamientos: 1) Neutrones; 2) Neutrones + B02; 3) BNCT 4) BNCT + B02; 5) Control sin irradiar. Las irradiaciones se llevaron a cabo en la facilidad de la columna térmica del reactor RA-3 (flujo= 1.1010 n/cm2 sec) con dosis de 1, 3 y 5 Gy (±10%). La sobrevida celular se evaluó por el ensayo de MTT y la medición del daño local se llevó a cabo por la técnica la inmunofluorescencia de la histona H2Ax 30 minutos luego de la irradiación. En paralelo se realizaron los mismos experimentos en una línea de melanoma para comparar especificidad de respuesta. Resultados: la dosis de B02 elegida fue la de 5 M. Cuando B02 fue incorporado al medio de cultivo antes de la irradiación con el haz de neutrones, solo a 5 Gy la sobrevida celular disminuyó significativamente luego del tratamiento con BNCT mientras que no lo fue en los demás grupos o en el mismo grupo a menor dosis. Los focos H2AX fueron más grandes luego de 30 minutos del tratamiento BNCT+B02. Conclusión: Pudimos observar que la sobrevida celular disminuye en los grupos N y BNCT y que al incorporar B02 antes de la irradiación el efecto es mayor en ambos grupos. El tamaño de los focos de daño es significativamente mayor en el grupo BNCT+B02 a los 30 minutos finalizada la irradiación indicando mayor severidad del daño en al ADN.