Efecto Bystander y Expresión De Genes Del Sistema Inmune en células de Adenocarcinoma de Colon HT29 en respuesta a BNCT

RODRIGUEZ C; FERREIRA Y; OGLIO R; PERONA M; THORP S; POZZI E; CUROTTO P; DAGROSA MA; THOMASZ L

Buenos Aires

Congreso; XLVI Reunión anual de la Asociación Argentina de Tecnología Nuclear; 2022

Asociación Argentina de Tecnologia

El cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más comúnmente diagnosticado en el mundo (Ferley 2015). En Argentina, el CCR es el segundo cáncer más frecuente y también el segundo en mortalidad. Los tratamientos para este tipo de cáncer incluyen cirugía (extirpación local o colectomía) con fines curativos o paliativos, quimioterapia, inmunoterapia y radioterapia. En lo que respecta a la radioterapia, suele ser administrada a pacientes que se encuentran en estadios avanzados de la enfermedad, en combinación con los tratamientos descritos anteriormente. Sin embargo, la eficacia de la irradiación con fotones se ve comprometida por las características físicas del propio haz, lo que resulta en la necesidad de equilibrar el control local del crecimiento tumoral con la incidencia de efectos secundarios en el tejido sano adyacente debido a la dispersión lateral de los fotones (Fitzek M, 1999).La terapia por Captura Neutrónica en Boro (BNCT) podría ofrecer una alternativa ya que permite concentrar la dosis terapéutica en el tumor a través de la acumulación de compuestos de boro-10 seguida de la irradiación con un haz de neutrones epitérmicos minimizando la dosis en órganos sanos cercanos reduciendo así los efectos secundarios durante el tratamiento. Con este fin se utiliza el aminoácido borofenilalanina (10 BPA) (Busse 2003, Aihara 2006) casi sin efectos tóxicos.BNCT podría ser particularmente importante en el tratamiento de metástasisgrandes o múltiples de hígado, ya que el riesgo de metástasis hepáticas inducidas por radiación podría ser mayor con técnicas basadas en fotones (Pozzi 2012, 2013). Sin embargo, no se sabe mucho sobre cómo BNCT contribuye a estos evidentes resultados terapéuticos desde el nivel celular y del microambiente tumoral.Por ello el objetivo de este trabajo es estudiar el efecto bystander de BNCT en células no irradiadas sobre su capacidad de proliferar y migrar y comenzar a estudiar el efecto directo sobre la expresión de genes relacionados con la respuesta del sistema inmune en células de adenocarcinoma de colon HT29 irradiadas.Procedimiento: Se incubaron células HT29 con 50 ppm de BPA (BNCT) o sin BPA (N) e irradiaron con 3 y 8 Gy de neutrones en el reactor nuclear RA3. Después de 24 horas o 4 días, se recogieron los sobrenadantes de las células irradiadas y se usaron como medio condicionado para ensayos de proliferación (MTT) y migración (heridas). Se extrajo el ARN total de las células irradiadas (24 horas y 4 días postirradiación) y se midió la expresión de genes relacionados con el sistema inmunitario (qPCR): Galectina-1 e INF. Además luego de 24 horas de la irradiación se detectó por inmunofluorescencia la presencia de ADN citosólico (dsDNA) el cual resulta ser altamente inmunogénico. Resultados:El medio condicionado de células irradiadas con 8 Gy y previamente incubadas con BPA (BNCT), recolectado 24 horas luego de la irradiación podría inducir una proliferación moderada en células no irradiadas. En otras condiciones, no se observaron cambios. Por el contrario, el medio condicionado de células irradiadas con 3 Gy incubadas con o sin BPA (N y BNCT) redujo la migración de células no irradiadas mientras que el medio condicionado de células irradiadas con 8 Gy con o sin BPA (N y BNCT) la indujo. En lo que respecta a la expresión génica, Galectina 1 (induce apoptosis en células T CD8) aumentó 24 horas luego de la irradiación con 3 Gy de neutrones. No se observaron diferencias a dosis mayores con o sin BPA. Sin embargo, luego de 4 días de la irradiación, los niveles de Galectina 1 disminuyeron a 3 Gy de neutrones solos mientras que a la misma dosis pero en presencia de BPA, los niveles de Galectina 1 aumentaron. Pudimos observar además que Galectina 1 aumenta a 8 Gy y que ese efecto parece disminuir en presencia de boro (grupo BNCT). Los niveles de IFN por su lado (relacionado con la respuesta inflamatoria y de memoria) muestran un considerable aumento cuando se irradia con 8 Gy con y sin BPA (N y BNCT).Conclusiones: La presencia de BPA durante la irradiación de neutrones sería beneficiosa a dosis más altas (8 Gy) dado que estos genes tienen incidencia en la respuesta inmune antitumoral: Galectina 1 induciendo a linfocitos T CD8 a apoptosis y por ello es favorable su disminución e IFN estimulando la respuesta inmune adaptativa hacia un perfil antitumoral. Como los efectos bystander no fueron concluyentes, se necesitarán más estudios para determinar si el medio condicionado es pro o antitumoral.