Rol de EPAC (Exchange protein activated by cAMP) en la protección por salbutamol (S, agonista adrenérgico β2) de la colestasis por estradiol 17β-glucurónido (E) en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR)

ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; BAROSSO, ISMAEL R.; OCHOA, J. ELENA; CROCENZI, FERNANDO A.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J

Mar del Plata, ARGENTINA

Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Vimos previamente que S modula el AMPc hepático y así previene de la colestasis por E de forma independiente de PKA y dependiente de microtúbulos (mt). Una vía de acción de AMPc independiente  de PKA es vía Epac. En DAHR, se evaluó la prevención por Epac de la alteración funcional por E en los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2. También se comparó su acción preventiva con S y con glucagon(G, dependiente de PKA, independiente de mt). Se obtuvieronDAHR de ratas Wistar hembra adultas por perfusión con colagenasa y elutriación. Luego de5 hs de cultivo se trataron con un agonista Epac (8-CPT-AMPc, 50 µM, 15min) y se co-trataron con S 1OµM o G 1µM. Un grupo de preparaciones se pretrató 30 min con el inhibidorde mt colchicina (Col 1µM). Luego se incubó cada grupo experimental 20 min con E (50µM) o solvente. Finalmente, se expusieron 15 min a colil lisil fluoresceína (CLF 2µM, sustrato de Bsep) o clorometil fluoresceína diacetato(CMFDA 2,5 µM, cuyo metabolito, GMF, es sustratode Mrp2). Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon CLF (cvaCLF) o  GMF (cvaGMF). Resultados(media±SD): E redujo la cvaCLF y cvaGMF. Epac previno la reducción causada por E. Col inhibió laacción de Epac. Al contrario de G, S en conjunto con Epac no tuvo efectos aditivos(p<O.O5, n=3)   % cva Control E E-Epac E-S E-Epac-S E-G E-G-Epac E-Col E-Col-Epac CLF 100±0 49±6a 78±9b 77±6b 74±9b 74±3b 92±7c 63±1a 64±3a GMF 100±0 61±2a 94±3b 80±4b 88±5b 81±4b 106±2c 65±5a 72±3a   a difiere significativamente de control. b difiere significativamente de control y de E. c difiere significativamente de E, E-G, E-Epac. Conclusión: al igual que S, Epacprotege parcialmente de la alteración funcional por E por un mecanismodependiente de mt. A su vez, sus acciones conjuntasno muestran un efecto aditivo. Esto sugeriríaque S protegeactivando la vía Epac.