INVESTIGADORES
CROCENZI Fernando Ariel
congresos y reuniones científicas
Título:
En la colestasis por estradiol 17beta-glucurónido (E17G) en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR) la participación del receptor de estrógenos (RE) es posterior a la activación de PKCalfa (PKC)
Autor/es:
BAROSSO, ISMAEL R.; ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; TABORDA, DIEGO; CROCENZI, FERNANDO A.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J
Lugar:
Mar del Plata, ARGENTINA
Reunión:
Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)
Resumen:
La activación del RE es necesaria para ciertos efectos del
estradiol tales como la activación de quinasas de señalización: PKC y PI3K.
Previamente demostramos que ambas quinasas participan en la colestasis por
E17G, su derivado glucuronizado, por lo que se evaluó el rol del RE en esta
patología. La activación del RE se manifiesta por su fosforilación en ser118 y
puede ser bloqueada por ICI182,780 (ICI). Métodos: Estudios funcionales: DAHR
fueron tratadas con dosis crecientes de E17G (25-800 µM) en presenciade ICI (1
µM) yluego expuestas a clorometilfluoresceína diacetato un compuesto
lipofílico captado por difusión pasiva y convertido en glutation
metilfluoresceína (GSMF), sustrato de Mrp2. Por microscopía de fluorescencia se
determinó el porcentaje de DAHR que acumularon GSMF en la vacuola canalicular.
Se evaluó además el efecto conjunto de ICI y Gö6976 (1 µM), inhibidor de sobre el efecto de E17G (1OOµM) en la
acumulación vacuolar de GSMF, PKC. Resultados (n=3): Las curvas dosisrespuestas
mostraron que ICI aumentó CE50 de E17G (86±4µM vs 317±24µM, p<0.05). ICI y
Gö6976 protegieron sin sumar sus efectos
(E17G:66±6%, E17G+ICI:87±4%, E17G+Go:89±2%, E17G+ICI+Go:84±7%, p<0.05)
sugiriendo que comparten una misma vía de señalización. Para establecer un
orden de activación se evaluó la activación del RE inducida por E17G (100µM)
en presencia de Gö6976 (estimada por Western blot [WB] del RE fosforilado
relativizado al RE total) y la activación de PKC por E17G (1OOµM) en presencia
de ICI (evaluada por translocación de PKC a membrana estimada por WB). Se
observó que ICI no previno la activación de PKC inducida por E17G, en cambio,
Gö6976 previno la activación de RE inducida por E17G (%Control= E17G:176±3%,
E17G+Go:88±12%, p<0.05, n=3). Conclusiones: El bloqueo de la activación del
RE previene la alteración funcional del transportador Mrp2 producida por E17G.
El RE compartiría la vía de señalización con PKC, siendo la activación de la
quinasa previa a la activaciónde RE.