ESTRADIOL 17ß-D-GLUCURÓNIDO (E17G) INDUCE ENDOCITOSIS DE BSEP Y MRP2 DEPENDIENTE DE CLATRINA EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA (DAHR)

MISZCZUK, GISEL SABRINA; BOAGLIO, ANDREA C; BAROSSO, ISMAEL R.; LAROCCA, M CECILIA; ROMA, MARCELO G; CROCENZI, FERNANDO A.

Mar del Plata

Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2014

SAIC

Previamente, demostramos que los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2, ambos esenciales para la formación de bilis, sufren internalización endocítica en diferentes modelos de colestasis, tal como la inducida por E17G, siendo este fenómeno responsable de la falla secretora biliar. Se desconoce el mecanismo por el cual E17G induce dicha endocitosis, siendo su dilucidación el objetivo de este trabajo. Métodos: Las DAHR se obtuvieron por el método de doble perfusión de hígados con colagenasa, se enriquecieron por elutriación, se cultivaron 4,5 hs. en placas cubiertas con colágeno (37ºC, 2x104 cél/mL) en medio L15 y, finalmente, se expusieron a E17G 200 μM durante 20 min, o a su vehículo (DMSO; grupo control). Se realizaron pre-tratamientos de 15 min para inhibir la endocitosis dependiente de clatrina con i) monodansil-cadaverina (MDC) 100 μM o ii) depleción de K+ (-K+), así como la endocitosis dependiente de caveolina con filipina (F) 1μg/mL. La actividad de Bsep y Mrp2 se evaluó determinando, por análisis de imágenes, el% de DAHR (>200) que exhibieron acumulación vacuolar canalicular (AVc) de los sustratos fluorescentes CGamF (Bsep) y GS-MF (Mrp2) por microscopía de fluorescencia, luego de ser incubadas durante 15 min con 0,3 μM CGamF o con 2,5 μM CMFDA (precursor de GSMF). Resultados: E17G disminuyó, respecto del control (100%), la AVc de CGamF y GS-MF (45,8±7,5% y 48,7±8,6%, respectivamente, p<0,05). Dicho fenómeno fue prevenido con inhibidores de la endocitosis dependiente de clatrina (MDC+E17G: 88,8±13,4% y101,7±7,4%, -K++E17G: 81,9±12,3% y 90,0±16,5%). En cambio, la inhibición de la endocitosis dependiente de caveolina con F no afectó la disminución de la AVc de CGamF y GS-MF inducida por E17G (F+E17G: 48,6%±10,7% y 40,9%±11,7%, respectivamente).Conclusión: La alteración del transporte mediado por Bsep y Mrp2 inducida por E17G es debida al proceso de internalización endocítica dependiente de clatrina que sufren ambos transportadores.