INVESTIGADORES
CROCENZI Fernando Ariel
congresos y reuniones científicas
Título:
EL TAUROURSODESOXICOLATO (TUDC) PREVIENE LA COLESTASIS POR ESTRADIOL 17β-D-GLUCURÓNIDO (E217G) IMPIDIENDO LA ACTIVACIÓN DE VÍAS DE SEÑALIZACIÓN PRO-COLESTÁSICAS.
Autor/es:
BOAGLIO, ANDREA C; MISZCZUK, GISEL SABRINA; TOLEDO, FLAVIA D.; ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; BAROSSO, ISMAEL R.; CROCENZI, FERNANDO A.; ROMA, MARCELO G
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XVII Congreso Argentino de Hepatología; 2013
Institución organizadora:
Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)
Resumen:
Introducción y Objetivos: Previamente,
nuestro grupo demostró que el metabolito estrogénico colestásico E217G altera
la función y localización de los principales transportadores canaliculares responsables
de la formación de bilis, Mrp2 (Hepatology 35: 1409-19, 2002) y Bsep (Am J
Physiol 285: G449-59, 2003), a través de la activación de vías de
señalización mediadas por proteína quinasa C clásica (PKCc) (Hepatology 48:
1885-95, 2008) y fosfatidilinositol 3 quinasa (PI3K)/Akt (Hepatology 52: 1465-76,
2010); mientras que PKCc induce internalización endocítica de esos
transportadores, PI3K/Akt promueve su posterior retención intracelular. El ácido ursodesoxicólico (AUDC)
es el medicamento de elección para tratar la
colestasis gravídica, una patología asociada a niveles aumentados de E217G.
Sin embargo, ni la capacidad del AUDC para contrarrestar la colestasis por E217G
ni sus mecanismos moleculares de acción han sido indagados. Por lo tanto, evaluamos
si el tauroursodesoxicolato (TUDC), principal metabolito anticolestásico del UDCA, es capaz de contrarrestar
la colestasis inducida por E217G, y si lo hace inhibiendo la
activación de las vías pro-colestásicas PKCc y PI3K/Akt.
Metodología y Resultados: Se determinó, en cultivo
primario de hepatocitos de rata, la activación de PKCc (como el % de enzima translocada
a membrana) y la activación de Akt (% de su forma activa fosforilada), mediante
western blot. E217G (200
µM, 40 min) y TUDC (50 µM y 100 µM, 15 min), administrados separadamente, promovieron
la activación de PKCc y Akt. En cambio, el pretratamiento con TUDC (50 µM y 100
µM, 15 min) seguido de exposición a E217G previno la activación de
PKCc
(-31 ± 5% y -54 ± 4%; p<0.05).y de Akt (-39 ± 3% y -37 ± 2%; p<0.05).respecto
de E217G solo. La cuantificación
por análisis de imágenes de la acumulación apical de sustratos fluorescentes de
Bsep (colil-glicilamino-fluoresceína,
CGamF) y de Mrp2 (glutatión-metil-fluoresceína,
GS-MF) en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR) reveló que E217G (200
µM, 20 min) disminuyó la capacidad de las
DAHR para secretar apicalmente CGamF
(-59±2%) y GS-MF (-58±6%) (p<0,005 vs.
control), mientras que TUDC (50 µM y 100 µM, 15 min) previno
parcialmente estas alteraciones: CGamF (+61±7% y +72±6%) y GS-MF (+66±13% y +79±10%);
p<0,05 vs. E217G. La prevención
por TUDC de la disfunción secretora biliar fue confirmada en el hígado aislado y perfundido
de rata (HAPR), un
modelo que mantiene la integridad funcional y estructural del órgano intacto. La inyección intraportal de E217G (2 µmol) redujo
significativamente el flujo biliar (-59±14%, p<0,001). El pretratamiento con
TUDC 50 µM previno
parcialmente la caída del flujo por E217G (+127±12%, p<0,001),
mientras que TUDC 100 µM la previno completamente.