Prevención de la colestasis inducida por estradiol 17beta-D-glucurónido mediante modulación hormonal de AMPc

ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; BAROSSO, ISMAEL R.; BOAGLIO, ANDREA C; PELLEGRINO, JOSÉ M.; OCHOA, J. ELENA; ROMA, MARCELO G.; CROCENZI, FERNANDO A.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J.

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)

Introducción y objetivos: Estradiol 17β-D-glucurónido (E17G) es un metabolito colestásico endógeno cuyos niveles aumentan durante el embarazo. Previamente demostramos que dicho metabolito induce colestasis por internalización endocítica de transportadores canaliculares cruciales para la secreción biliar, tales como la bomba excretora de sales biliares Bsep y el transportador multiespecífico de aniones orgánicos Mrp2. Por otro lado se observó que AMPc previene de la colestasis por E17G. Dado que los niveles hepáticos de AMPc son modulados por hormonas como glucagón y agonistas β2 adrenérgicos, estudiamos su capacidad para prevenir la colestasis por E17G y evaluamos los mecanismos involucrados (dependencia de PKA, Epac e integridad de microtúbulos). Materiales y Métodos: Mediante perfusión del hígado de ratas hembra adultas con colagenasa seguido de elutriación, se obtuvieron duplas aisladas de hepatocitos (modelo in vitro polarizado), en las que se evaluó el efecto protector de Glucagón (Glu) y Salbutamol (Sal, agonista β2 adrenérgico) sobre la alteración producida por E17G en la localización y función de los transportadores Bsep y Mrp2. La participación de PKA se evaluó con inhibidores específicos (H89, KT5720), la de Epac con el agonista 8-CPT-2´-O-Me-cAMP y el inhibidor PD98059 (bloquea MEK 1/2 cascada debajo de Epac) y la dependencia de microtúbulos con colchicina. Los efectos de Glu y Sal también se evaluaron en rata entera (in vivo). Los animales se dividieron en tres grupos: 1) Sal i.p. 2,5 mg/Kg p.c.; 2) L-alanina 0,5 g/Kg p.c., i.p., en ratas ayunadas (eleva Glu plasmático); 3) Control (solución fisiológica, i.p.). Luego de 10 min, se inyectó E17G (9 µmol/Kg p.c., i.v.). Finalmente, se midieron flujo biliar, velocidades de excreción de bilirrubina, glutatión (sustratos de Mrp2) y sales biliares (sustrato de Bsep) por 120 min. Resultados: In vitro: Glu y Sal protegieron de la alteración funcional y de la internalización endocítica de Mrp2 y Bsep producida por E17G. La protección por Glu mostró ser PKA-dependiente y no requirió la integridad de microtúbulos. Contrariamente la protección por Sal requirió la activación de Epac y la integridad de microtúbulos. In vivo: La inyección de E17G indujo una disminución aguda del flujo biliar a los 20 min, que se recuperó parcialmente durante el período de recolección (120 min). El tratamiento con alanina o Sal no previno la caída, pero aceleró significativamente la recuperación del flujo biliar a la normalidad. Se observó un comportamiento similar con la excreción de sales biliares, bilirrubina y glutatión. Conclusiones: El aumento en los niveles de AMPc hepático por Glu y agonistas β2 adrenérgicos modula la falla secretora inducida por E17G promoviendo la reinserción de transportadores canaliculares claves para la secreción biliar. Esta protección se daría por mecanismos diferentes e independientes. La modulación de estas hormonas podría ser de utilidad como estrategia terapéutica en patologías colestásicas.