INVESTIGADORES
CROCENZI Fernando Ariel
congresos y reuniones científicas
Título:
Las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPKS) median la alteración secretora biliar inducida por estradiol 17beta-glucurónido (E217G)
Autor/es:
BOAGLIO, ANDREA C; ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; TOLEDO, FLAVIA D.; BAROSSO, ISMAEL R.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J; CROCENZI, FERNANDO A.; ROMA, MARCELO G.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)
Resumen:
Introducción
y Objetivos: En estudios previos, demostramos que el agente colestásico E217G
induce alteraciones en la función y localización de los transportadores
canaliculares responsables de la formación de bilis Bsep y Mrp2, vía activación
de proteínas quinasa C dependientes de Ca2+ (cPKC) (Hepatology 48: 1885-95), y
que los transportadores endocitados son retenidos vía la simultánea activación
de fosfoinositosido 3 quinasa (PI3K) (Hepatology 52: 1465-76, 2010). Dado que
se ha descripto que tanto cPKC como PI3K regulan la actividad MAPK, indagamos
la posible mediación de diferentes isoformas de MAPKs (ERK 1/2 JNK y p38MAPK)
en las alteraciones canaliculares inducidas por E217G en duplas aisladas de
hepatocitos de rata (DAHRs) y en hígados aislados y perfundidos de rata
(HAPRs).
Resultados:
E217G activó todos los tipos de MAPKs, indicado por un aumento del grado de
autofosforilación de sus isoformas por Western blotting. La cuantificación de
la acumulación apical de sustratos fluorescentes de Bsep y Mrp2 por análisis
digital de imágenes reveló que E217G (200 µM) disminuyó la capacidad de las
DAHRs para secretar ápicalmente colil-lisil-fluoresceína (CLF; -59±2%,
p<0.005) y glutation-metil-fluoresceína (GS-MF; -58±6%, p<0.005),
sustratos respectivos de Bsep y Mrp2. Los inhibidores selectivos de MAPKs del
tipo ERK 1/2 (PD098059, 50 mM) y del tipo p38MAPK(SB203580, 1 µM) previnieron
parcialmente estas alteraciones (PD098059: CLF: +57±7%, GS-MF: +51±13%;
SB203580: CLF: +43±7%, GS-MF: +68±4; % >200 duplas en cada grupo, n=3-4,
p<0.05 vs. E217G). En cambio, el inhibidor de JNK (SP600125, 1 µM) no tuvo
efecto alguno. Inmunomarcación seguida de microscopía confocal revelaron que
E217G indujo una extensa internalización de Bsep y Mrp2, y que el
pretratamiento con los inhibidores de ERK 1/2 y p38MAPK, a las dosis empleadas
en los estudios de funcionalidad, previnieron parcial pero significativamente
estas alteraciones (p<0.05). El efecto protector de los inhibidores de E1/2y
p38MAPK fue aún mayor que aquel inducido por el inhibidor de PI3K wortmanina
(100 nM) y por el inhibidor de cPKC Gö6986 (1 µM), sugiriendo y MAPK actúan, al
menos parcialmente, como una vía independientes que PI3K/cPKC. En hígado
aislado y perfundido, E217G (2 µmol) redujo significativamente el flujo biliar
(-69±14%, p<0.001), y el inhibidor de p38MAPK SB203580 (1 µM) previno
significativamente esta caída (+126±18%; p<0.001).
Conclusión: Las
MAPKs del tipo ERK 1/2 y p38MAPK participan en la alteración de la función
secretora biliar inducida por E217G, promoviendo internalización endocítica de
transportadores canaliculares.