INVESTIGADORES
CROCENZI Fernando Ariel
congresos y reuniones científicas
Título:
Protección por glucagon de la colestasis por estradiol 17ß-glucurónido en la rata es independiente de microtúbulos y dependiente de PKA.
Autor/es:
ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; CROCENZI, FERNANDO A.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J
Lugar:
Buenos Aires, ARGENTINA
Reunión:
Congreso; XV Congreso Argentino de Hepatología; 2009
Institución organizadora:
Asociación Argentina para el estudio de las enfermedades del hígado (AAEEH)
Resumen:
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AMPc previene la
colestasis por estradiol-17ß-glucurónido (E17G) por un mecanismo dependiente de
la integridad de los microtúbulos e independiente de PKA. La hormona glucagon (G)
eleva los niveles hepáticos de AMPc y tiene efectos protectores sobre la colestasis
por E17G. El objetivo de este trabajo fue comparar los efectos protectores de G
y AMPc sobre la colestasis por E17G. Se utilizó un
modelo in vitro de duplas aisladas de hepatocitos (DAHR). Estas se obtuvieron
por perfusión con colagenasa seguida de elutriación. Luego de 5 hs de cultivo,
DAHR se incubaron con G (0,4mg/l) o dibutiril-AMPc (DBAMPc, análogo difusible
de AMPc, 10 µM) por 15 min, seguido de incubación con E17G (50 μM) o solvente por
20 min y finalmente expuestas a colil lisil fluoresceína (CLF, sustrato de Bsep,
2 µM) o clorometil fluoresceína diacetato (CMFDA, cuyo metabolito conjugado con
glutation, GMF, es sustrato de Mrp2, 1 µM) por 15 min adicionales. Por
microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon CLF
(acCLF) o GMF (acGMF). Otras preparaciones de DAHR fueron preincubadas antes de
exponerlas a G o AMPc con colchicina (COL, inhibidor de microtúbulos, 1 µM) o los
inhibidores de PKA, H89 (0,1μM) o KT5720 (50 nM). Resultados: la preincubación
de DAHR con COL previno el efecto de DBAMPc sobre la colestasis por E17G pero
no afectó el efecto preventivo de G (acCLF (%) Control: 100±0, COL: 99±3; G:
102±5; E17G: 51±3a; E17G/COL: 54±13a; E17G/G: 86±12b;
E17G/COL/G: 82±9b; E17G/DBAMPc: 94±18b; E17G/COL/DBAMPc: 58±9a;
acGMF (%) Control: 100±0, COL: 99±1; G: 101±2; DBAMPc: 101±1; E17G: 56±7a;
E17G/COL: 60±7a; E17G/G: 88±5b; E17G/COL/G: 94±8b;
E17G/DBAMPc: 95±10b; E17G/COL/DBAMPc: 65±4a; a
diferente de Control y b diferente de E17G y E17G/COL, n=4,
p<0.05); la inhibición de PKA previno el efecto de G sobre la colestasis por
E17G sin afectar el efecto de DBAMPc (acCLF (%) H89: 98±2; KT5720: 100±2,
E17G/H89: 56±5a; E17G/KT5720: 57±7a; E17G/G/H89: 59±10a;
E17G/G/KT5720: 65±5a, E17G/DBAMPc/H89: 95±19b; E17G/DBAMPc/KT5720:
94±17b; acGMF (%) E17G/G/H89: 66±3a; E17G/G/KT5720: 67±11a,
E17G/DBAMPc/H89: 94±8b; E17G/DBAMPc/KT5720: 93±5b, a
diferente de Control y E17G/G y b diferente de E17G, n=4,
p<0.05). Conclusión: Glucagon
protege de la disminución en la actividad de los transportadores Bsep y Mrp2 inducida
por E17G por un mecanismo independiente de microtúbulos y dependiente de la
activación de PKA. Este mecanismo protectivo difiere del que manifiesta DBAMPc.
Esto podría indicar que existen dos vías por las que AMPc protege de la
colestasis: una vía dependiente de la síntesis del mensajero inducida por la
hormona que lo hace a través de PKA sin la necesidad de microtúbulos y la otra,
en la que el AMPc aumenta intracelularmente por difusión desde el exterior,
requiere la integridad de microtúbulos y lo hace sin activar PKA.
