EVALUACIÓN DE LA PARTICIPACIÓN DEL RECEPTOR DE ESTRÓGENO (RE) EN LA ALTERACIÓN DE LA EXCRECIÓN DE SALES BILIARES INDUCIDA POR ESTRADIOL-17ß-D-GLUCURÓNIDO (E) EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA (DAHR).

BAROSSO, ISMAEL; ZUCCHETTI, ANDRÉS ERNESTO; TABORDA, DIEGO; CROCENZI, FERNANDO A.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J

Mar del Plata, ARGENTINA

Congreso; LIV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La activación del RE participa en efectos del estradiol tales como la activación de moléculas de señalización intracelular: PKC y PI3K. Ambas quinasas participan en la colestasis por E, su derivado glucuronizado, por lo que fue de interés evaluar el rol de RE en esta patología. La activación del RE se manifiesta por su fosforilación en ser118 y puede ser bloqueada por ICI 182780 (ICI). Métodos: Estudios funcionales: DAHR fueron tratadas con concentraciones crecientes de E (25-400 μM) en presencia de ICI (1μM) y luego expuestas a colil-lisilfluoresceína (CLF, análogo fluorescente de sales biliares). Por microscopía de fluorescenciase determinó el porcentaje de DAHR que acumularon CLF (cvaCLF). Activación de RE: Membranas totales de hepatocitos tratados con E (100μM) por 15 min fueron sometidas a Western blot (Wb) y reveladas con anti-RE fosforilado en ser118. Resultados (n=3): Las curvas concentración-respuesta mostraron que ICI aumentó IC50 de E (163±5μM vs 93±5μM, p<0.05). Wb reveló que E aumentó fosforilación de RE (Control: 100±0%, E: 335±19%, p<0.05). Dado que PKCalfa participa de la colestasis por E se analizósi el RE y PKCalfa compartían la misma vía o son activados independientemente. Para esto se evaluó el efecto conjunto de ICI y Gö6976 (1μM), inhibidor de PKCalfa en cvaCLF y se evaluó el nivel de activación de PKC inducida por E (100μM) en presencia de ICI estimada por la translocación de PKC a membrana medida por Wb. ICI (44±7%, p<0.05) y Gö6976 (42±3%, p<0.05) lograron el mismo grado de protección frente a E (32±3%, C:54±5%), la cual no mejoró en presencia de ambos (43±2%, p<0.05). Sin embargo, ICI no previno la activación de PKC inducida por E (%PKC en membrana: E:96±5%, E+ICI:92±5%, Control: 36±7%). Conclusiones: E activa el receptor de estrógenos y su bloqueo previene la colestasis. RE compartiría la vía de señalización con PKC aunque el bloqueo de RE no modifica la activaciónde PKC por lo que la unión de E a RE no sería previa a la activación de PKC.