Estudio de las bases moleculares responsables de un fenotipo D variante

LUJÁN BRAJOVICH M; TRUCCO BOGGIONE C; PRINCIPI C; MUFARREGE N; MATTALONI S; ENSINCK A; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; COTORRUELO C

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2019

El locus RH está formado por los genes RHD y RHCE que codifican proteínas homónimas localizadas en la membrana eritrocitaria. Ambos genes comparten una alta homología y albergan numerosos elementos repetitivos que pueden servir como sitios para la recombinación, dando lugar a alelos nuevos. Los polipéptidos Rh expresan numerosos antígenos, de los cuales el epitope D es el más inmunogénico, constituyéndolo en uno de los antígenos más importante en medicina transfusional y obstétrica. La determinación serológica del fenotipo D se realiza en base a técnicas estandarizadas de hemaglutinación. Frecuentemente estas metodologías permiten identificar fenotipos D variantes como resultados de reacciones de aglutinación antígeno-anticuerpo fuertemente positivas antes de los 10 segundos o débilmente positivas posteriores a los 120 segundos. Las estrategias de biología molecular permiten caracterizar las bases genéticas responsables de la expresión alterada del antígeno D. El objetivo de este trabajo fue analizar la expresión de los antígenos D, C, c, E y e del sistema Rh e identificar las bases moleculares responsables de un fenotipo con expresión exacerbada del antígeno D. Se estudió una muestra de sangre periférica perteneciente a una mujer de 35 años. Para el estudio del antígeno D se realizó la tipificación de rutina en placa con un anticuerpo anti-D mezcla de anticuerpos monoclonales humanizados IgM/IgG (Blend) (clones TH-28- secretor de IgM y MS-26- secretor de IgG). Se observó una reacción fuertemente positiva (intensidad 4+, único aglutinado) antes de los 2 segundos de iniciada la reacción. Se estudiaron los antígenos C, c, E y e mediante técnicas de aglutinación en columnas de gel SEPADEX G conteniendo anticuerpos monoclonales provenientes de distintas líneas celulares: anti-C (clones MS-24, MS-273, P3x25513G8), anti-Cw (clon MS-110), anti-c (clon MS-33, 951), anti-E (clon MS-260, MS-80, MS-258), anti-e (clones MS-16, MS-21, MS-63, MS-62, P3GD512). Se investigó la estructura molecular de los genes RHD y RHCE por estrategias de biología molecular basadas en PCR-SSP y PCR-RFLP. Los estudios de micro tipificación en gel no detectaron expresión de los antígenos C, c, E ni e. Se identificaron SNPs RHCE específicos correspondientes al exón 1, 2, 9 y a la región 3´UTR, sugiriendo que la muestra en estudio sería portadora de una estructura alélica híbrida RHCE(1-2)-D(3-8)-CE(9-10) en estado homocigota. Probablemente, a causa de un evento de conversión génica entre secuencias homólogas de los genes RHD y RHCE, un segmento de ADN de un alelo RHD se ha insertado en un alelo RHCE. La presencia de secuencias RHD específicas a lo largo de casi toda la nueva estructura recombinante sería la responsable de la elevada expresión del antígeno D detectada en la muestra de la paciente portadora de esta variante alélica. La detección de estas variantes D es de fundamental importancia en hemoterapia ya que permite decidir la conducta transfusional y obstétricas adecuadas.