Estudios de estabilidad de ADN

MORENO A; RACCA A; GARCÍA BORRÁS S; COTORRUELO C; BIONDI C

Rosario

Congreso; V Congreso y 9º Encuentro Bioquímico; 2009

Areas Clínicas - Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas

La saliva es una fuente potencialmente útil de ADN genómico para estudios genéticos, ya que puede ser recolectada en forma no invasiva. El objetivo del siguiente trabajo fue estudiar la estabilidad del ADN genómico extraído a partir de muestras de saliva, mediante el análisis de las variables alélicas del gen FUT2. Trabajamos con muestras de saliva y sangre periférica (controles) provenientes de dadores voluntarios sin patología demostrable, que concurrieron al Servicio de Hemoterapia del Hospital Provincial del Centenario de Rosario (n=62). El ADN genómico de las muestras de sangre periférica fue extraído por la técnica de CTAB-DTAB. Se diseñó un protocolo para la extracción del ADN a partir de saliva. Las mismas fueron sometidas a choque térmico y luego centrifugadas para trabajar con el botón celular. Se adicionó directamente CTAB omitiendo el agregado de tampón TE. Las muestras de ADN obtenidas de saliva y sangre periférica, fueron analizadas mensualmente durante un período de 6 meses en un gel de agarosa al 1% teñido con bromuro de etidio. Se realizó una reacción de PCR con cebadores específicos para el alelo G428A y para el alelo wild type del gen FUT2. Los productos de PCR (132 pb) fueron examinados  por electroforesis. Los resultados obtenidos mostraron que el ADN proveniente de sangre periférica presenta mayor estabilidad en el tiempo comparado con el ADN extraído a partir de muestras de saliva. La degradación observada fue a partir del cuarto mes. El estudio del carácter secretor por técnicas de PCR mostró que de las 62 muestras de sangre y saliva, 8 fueron positivas para el alelo G428A y 54 presentaron el alelo wild type. Estos hallazgos indican que el ADN obtenido en forma no invasiva podría ser utilizado para los estudios moleculares hasta el quinto mes de su extracción.