Modificaciones de las proteínas de membrana en eritrocitos senescentes

ENSINCK A; MUFARREGE N; RUCCI A; RACCA L; GARCÍA BORRÁS S; COTORRUELO C; BIONDI C; RACCA A

Mar del Plata - Argentina

Congreso; LVII Reunión Científica. Sociedad Argentina de Inmunología; 2009

SAIC - SAI

Debido a que los glóbulos rojos (GR) maduros son incapaces de sintetizar proteínas, se considera que alteraciones conformacionales y/o químicas en proteínas pre-existentes, producen cambios reconocibles en la superficie de la membrana. Las modificaciones de la principal proteína eritrocitaria banda 3, conducen a la exposición de un antígeno de senescencia implicado en la remoción selectiva de los GR senescentes (GRSe). El objetivo de este trabajo fue estudiar las modificaciones estructurales y oxidativas de las proteínas de membrana en poblaciones de distintas edades: GRSe y GR jóvenes (GRJ). Muestras de sangre periférica (n=15) de dadores voluntarios fueron centrifugadas en gradientes de Percoll para obtener poblaciones de GRSe y GRJ. Se prepararon las membranas eritrocitarias por lisis osmótica y se solubilizaron en buffer con SDS. Las proteínas se analizaron por SDS-PAGE. La estimación de la oxidación de las proteínas se realizó midiendo los grupos carbonilos por ELISA. La banda 3 se determinó por inmunobloting. Las suspensiones eritrocitarias fueron incubadas con anti-IgG humana marcada con Alexa 488 y observadas por microcopía confocal. La densitometría de los geles no mostró cambios en el patrón de bandas entre ambas poblaciones eritrocitarias. El análisis de la oxidación de las proteínas demostró un aumento estadísticamente significativo en las suspensiones de GRSe (GRSe: 0.58±0.09 nmoles/mg prot vs GRJ: 019±0.05; p<0.01). En el inmunoblotting se observaron diferencias significativas en la proteína banda 3 (GRSe:88.3±15.4 vs GRJ:58.2±10.2; p<0.05) y sus productos de degradación (22.1±5.8 vs 17.0±5.2; p<0.05). Por microscopía confocal observamos la presencia de IgG en los GRSe, mientras que los GRJ no presentaron imágenes de fluorescencia. Los resultados obtenidos demuestran modificaciones en las proteínas de membrana durante el envejecimiento eritrocitario y confirman la participación de IgG autóloga en el reconocimiento y remoción selectiva de los GRSe.