COMPARACION DE LA EFICIENCIA DE DOS METODOS DE SEPARACION DE POBLACIONES ERITROCITARIAS DE DISTINTAS EDADES

LUJÁN M; RUCCI A; COTORRUELO C; GARCÍA BORRÁS S; RACCA L; ACOSTA L; BIONDI C; RACCA A

Rosario - Argentina

Congreso; IX Congreso y XXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2007

Sociedad de Biología de Rosario

El esfuerzo para identificar los cambios que ocurren en el Glóbulo Rojo (GR) a medida que envejece, ha estimulado una intensa investigación. Sin embargo, no se han logrado aún conclusiones definitivas, debido fundamentalmente a que la senescencia es un proceso continuo que no produce ningún cambio crítico que permita reconocer con precisión los GR Senescentes (GRSe). Los métodos más comúnmente empleados para separar estas células, están basados en el aumento de la densidad que presentan a medida que envejecen. El objetivo de este trabajo fue comparar la eficiencia en la separación de poblaciones eritrocitarias de distintas edades, utilizando dos métodos preparativos: centrifugación diferencial (CD) y gradientes de Percoll (GP). Se procesaron 10 ml de muestras de sangre periférica anticoagulada con ACD, de dadores voluntarios con serología negativa, que concurrieron al Servicio de Hemoterapia del Hospital Provincial del Centenario. Las poblaciones de GR Jóvenes (GRJ) y GRSe fueron obtenidas por CD (n=15) y por GP (n=12). En alícuotas de ambas suspensiones celulares se analizaron los principales parámetros que discriminan entre GRJ y GRSe. Se determinó el Volumen Corpuscular Medio (VCM) en un contador SYSMEX SF–3000, el % de reticulocitos (R) con azul brillante de cresil y el % de monocitos activos (MA) mediante el ensayo de eritrofagocitosis. Las diferencias de los valores obtenidos en las variables analizadas entre GRJ y GRSe por los dos métodos de separación empleados fueron para VCM (CD: 1.72±3.54 vs GP: 2.35±0.57); R (CD: 1.69±0.37 vs GP: 1.66±0.24) y MA: (CD: 14.10±1.89 vs GP: 14.25±1.83). Al aplicar la t de student para muestras independientes, los promedios de las diferencias de los valores de VCM, R y MA en GRJ y GRSe no difieren significativamente entre los dos métodos utilizados (p>0.05). Los resultados similares obtenidos en los parámetros estudiados, utilizando ambos métodos preparativos, indican que su eficiencia de separación es comparable. Debido a que GP permite obtener un mayor rendimiento de las poblaciones de GRJ y GRSe, sería recomendable en estudios de los mediadores involucrados en el proceso de senescencia eritrocitaria, que demandan la utilización de gran cantidad de muestra.