ESTUDIO DE LA CIGOSIDAD DEL GEN RHD POR TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR.

COTORRUELO C; BIONDI C; GARCÍA BORRÁS S; RACCA A

Rosario - Argentina

Congreso; VIII Congreso y XXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2006

Sociedad de Biología de Rosario

La determinación de la cigosidad paterna RHD es importante en la Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal. Recientemente se ha descubierto que el gen RHD está flanqueado por secuencias de ADN homólogas denominadas cajas Rhesus que contienen una “región de identidad” de 1463 pb iguales. La deleción del gen RHD responsable del fenotipo RhD- es el resultado del entrecruzamiento desigual entre las regiones de identidad 5’ y 3’ formando una caja Rhesus híbrida. El objetivo de este trabajo fue evaluar una estrategia de PCR para determinar la cigocidad RHD por amplificación de cajas Rhesus híbridas.  Se estudiaron 82 tríos (padre, madre e hijo). Se determinó el fenotipo Rh por hemaglutinación. El estudio de las cajas Rhesus híbridas fue realizado por PCR utilizando un par de cebadores que flanquean la región de identidad y son complementarios a secuencias presentes en las cajas Rhesus 5’ y 3’ respectivamente. Estos cebadores permiten la amplificación de un fragmento de ADN de 1981 pb de las cajas Rhesus híbridas presentes en individuos RhD- y RhD+ heterocigotas. Las muestras RhD- (n=44) y las muestras RhD+ cuya condición heterocigota fue confirmada por estudios familiares (n=35) fueron PCR positivas. En el resto de las muestras RhD+ (n=167) la cigocidad asignada por PCR fue coincidente con el genotipo más probable a excepción de 8 casos. Una muestra asignada homocigota y 7 heterocigotas por serología se genotipificaron PCR positiva y PCR negativas respectivamente. Todos los resultados mostraron coherencia dentro de cada trío. Las discrepancias halladas pueden atribuirse a haplotipos de baja frecuencia cuya cigocidad no es asignada correctamente por métodos serológicos. El método molecular desarrollado es simple y confiable y puede ser aplicado para analizar la cigocidad RHD en padres RhD+, permitiendo un mejor manejo de embarazadas sensibilizadas.