TRANSPORTE DE NH3/NH4+ Y COMPLEJO Rh EN LA MEMBRANA ERITROCITARIA

MUNINI G; BIONDI C; GARCÍA BORRÁS S; RACCA L; RACCA A; COTORRUELO C

Rosario - Argentina

Congreso; VIII Congreso y XXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2006

Sociedad de Biología de Rosario

Las proteínas RhD, RhCcEe, RhAG y las proteínas accesorias LW, CD47, GPB y Banda 3 se asocian en la membrana del glóbulo rojo (GR) formando el complejo Rh. El núcleo central de este complejo es un tetrámero compuesto por 2 proteínas RhD ó RhCcEe y 2 proteínas RhAG, estabilizadas por interacciones entre los dominios amino y carboxilo terminal. Las proteínas accesorias se asocian a este tetrámero por uniones no covalentes. Los polipéptidos Rh están relacionados con la familia de proteínas transportadoras de amonio, sin embargo no ha sido aún demostrada la función de este complejo en la membrana eritrocitaria. El objetivo de este trabajo fue analizar la participación del complejo Rh en el transporte de NH3/NH4+ a través de la membrana eritrocitaria. A partir de muestras de GR RhD+ (n=12) se prepararon las siguientes suspensiones al 5% en solución fisiológica: GR sin tratar, GR bromelinizados (GRB) y GR sensibilizados con anti-D (GRS). Se estudió la hemólisis por acumulación intracelular de NH4+ y Cl- en cada una de estas suspensiones a través de un ensayo cinético. Se incubaron volúmenes iguales de las mismas con un buffer isotónico conteniendo NH4Cl, KHCO3 y EDTA. Posteriormente se cuantificó la hemoglobina liberada por medida de la densidad óptica a 405 nm a diferentes intervalos de tiempo durante 40 minutos y se calculó el porcentaje de hemólisis comparando los resultados con la lisis total. En todas las muestras estudiadas, las tres suspensiones eritrocitarias presentaron diferentes porcentajes máximos de hemólisis aunque las curvas de hemólisis fueron similares. Los valores obtenidos en el tiempo en el que la suspensión de GR sin tratar alcanzó su máxima hemólisis fueron: GR sin tratar 0.642±0.117, GRB 0.447±0.107 y GRS 0.730±0.129. El análisis estadístico demostró que el porcentaje de hemólisis obtenido con las suspensiones de GRB fue significativamente menor al observado para GR sin tratar (19.5%, IC 95%: 16.5%-22.5%) mientras que las suspensiones de GRS alcanzaron un porcentaje de hemólisis marginalmente superior al de los GR sin tratar (8.9%, IC 95%: 7.3%-10.5%). Los hallazgos obtenidos con GR tratados con la enzima proteolítica bromelina indicarían que el transporte de NH3/NH4+ es mediado por proteínas de la membrana eritrocitaria. Además, la interacción de la proteína anti-D con el polipéptido RhD modificaría su estructura conformacional resultando en una mayor acumulación de NH4+ y Cl- en el citoplasma del GR.