EFECTO DE LA CIGOSIDAD DEL GEN RHD EN LA EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO D

LUJÁN M; TRUCCO BOGGIONE C; ENSINCK A; RACCA L; RACCA A; COTORRUELO C

Casilda

Congreso; XIV Congreso y XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2012

Sociedad de Biología de Rosario

Algunos antígenos de grupos sanguíneos se expresan en la membrana eritrocitaria bajo el efecto dosis. Los glóbulos rojos (GR) de individuos homocigotas para un alelo poseen mayor cantidad de determinantes antigénicas que aquella observada en los individuos heterocigotas para ese mismo alelo. Existen controversias sobre la influencia del efecto dosis en la expresión del antígeno D del sistema Rh ya que este fenómeno no puede ser detectado con precisión por los métodos serológicos de rutina. El objetivo de este trabajo fue estudiar la expresión del antígeno D en muestras homocigotas y hemicigotas para el gen RHD por citometría de flujo utilizando sangre entera. Se determinó la presencia del antígeno D en suspensiones eritrocitarias por técnicas serológicas de hemaglutinación utilizando un anticuerpo monoclonal anti-D IgM/IgG (clones TH28 / MS26). Las muestras RhD positivo (n=26) fueron analizadas por técnicas moleculares de PCR SSP y PCR RFLP para determinar la cigosidad del gen RHD mediante la detección de caja Rhesus híbridas. Se estudió la expresión del antígeno D por citometría de flujo en las muestras homocigotas y hemicigotas. Las muestras y los controles (GR RhD negativo) se incubaron con anti-D policlonal y luego con anti-IgG humana marcada con Alexa 488. Se utilizó un citómetro FACSAria II. Se adquirieron 100.000 eventos y los datos fueron analizados con el programa FACSDiva. El análisis estadístico de los resultados permitió determinar que la variable media aritmética de la intensidad de fluorescencia media (IFM) asociada a la expresión del antígeno D fue: muestras homocigotas: 19157.1 ± 5217.93 y muestras hemicigotas: 13200.5 ± 3006.28. El valor promedio obtenido de la media aritmética fue significativamente mayor en la muestras homocigotas respecto de las hemicigotas (p<0.005, Test t de Student). El aumento de la IFM observada en las muestras homocigotas sería el resultado del efecto dosis que ejercería el gen RHD en la expresión del antígeno D. La determinación de la cigosidad RHD resultaría adecuada para elaborar paneles globulares que contengan unidades homocigotas y hemicigotas para asegurar una amplia variabilidad en la expresión del antígeno D, incrementando la sensibilidad de la detección de anticuerpos irregulares anti-D.