DETERMINACIÓN DEL MARCADOR CD44 EN MUESTRAS DE SALIVA DE PACIENTES CON LESIONES ORALES

VALLES M; ENSINCK A; LEBENSOHN N; RACCA L; COTORRUELO C; BIONDI C

Casilda

Congreso; XIV Congreso y XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2012

Sociedad de Biología de Rosario

Actualmente se sabe que el marcador CD44 cumple una variedad de funciones entre las que se destaca la de actuar como molécula de adhesión en interacciones entre linfocitos y células endoteliales y constituir un potencial marcador de malignidad tumoral y metástasis. Esta proteína participa en las funciones normales de las células, pero en el cáncer está sobreexpresada y aparece con distintas isoformas, implicadas en la generación tumoral. Esta molécula de adhesión y su forma alterada se encuentra también en los fluidos corporales. El objetivo de este trabajo fue investigar la expresión del marcador CD44 en pacientes con lesiones orales malignas, pre malignas y benignas, utilizando dos técnicas diferentes para la preparación de las muestras. Se trabajó con muestras de saliva (n=68), las cuales fueron sometidas a choque térmico y lavadas con tampón fosfato salino (PBS). Las mismas fueron concentradas por centrifugación y luego fijadas sobre portaobjetos con paraformaldehído al 4%. Los preparados fueron incubados con un anticuerpo anti-CD44 y posteriormente con un anticuerpo secundario marcado con aloficocianina. Los mismos fueron observados por microscopía confocal utilizando láser rojo a 639 nm. Paralelamente, todas las muestras fueron procesadas por la misma técnica pero sin realizar la fijación con paraformaldehído. Además, se trabajó con muestras de salivas de dadores voluntarios, sin patología demostrable (n= 70) constituyendo el grupo control. Los resultados fueron semicuantificados desde fluorescencia fuertemente positiva a negativa. Se observó la misma intensidad de fluorescencia correspondiente a la presencia de la proteína CD44 en las muestras de los pacientes con diagnóstico de cáncer y precáncer (n=47) utilizando ambas técnicas. En cambio, las muestras fijadas y sin fijar, provenientes de pacientes con lesiones benignas (n=21) no presentaron imágenes de fluorescencia como las muestras del grupo control. Los resultados obtenidos por ambos métodos son totalmente coincidentes tanto en pacientes como en controles. La proporción de individuos clasificados en la misma categoría por los dos métodos no puede deberse al azar, existe una total concordancia en los resultados obtenidos con los dos métodos. El valor del índice de Kappa es 1 (p<0.0001), indicando una concordancia total. La técnica de fijación sobre portaobjetos con paraformaldehído permite obtener preparaciones duraderas las cuales mantienen su estructura morfológica y química, y pueden ser conservadas para su posterior procesamiento.