ESTUDIO DE ANTÍGENOS ABH EN PACIENTES CON CÁNCER DE MAMA POR DOS TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS

LEBENSOHN N; AGUIRRE R; MORETTO V; NOCITO A; COTORRUELO C; DI PAOLO O; BIONDI C

Zavalla

Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013

Sociedad de Biología de Rosario

Los grupos sanguíneos representan las variaciones del polimorfismo genético observadas en las células sanguíneas y en las células epiteliales humanas. Existe evidencia que la diferenciación celular se refleja en la presencia o ausencia de ciertos antígenos de superficie, asociados a la membrana celular, entre ellos los del sistema ABO. En algunos procesos neoplásicos el estudio de la alteración de estos antígenos podría contribuir al diagnóstico precoz de algunos tumores. En el cáncer de mama se utilizan una serie de técnicas para su análisis por microscopía óptica, que van desde la coloración convencional con hematoxilina y eosina, hasta la demostración de antígenos específicos con marcaje inmunohistoquímico. El objetivo de este trabajo fue estudiar la expresión de los antígenos ABH en cortes histológicos de pacientes con diagnóstico presuntivo de cáncer de mama por dos técnicas inmunohistoquímicas. Se trabajó con muestras de tejido incluidas en tacos de parafina (n=27) provenientes de las pacientes en estudio, derivadas del Servicio de Anatomía Patológica de la Fac. de Cs. Médicas de la UNR. Las secciones del tejido, fueron montadas sobre portaobjetos polisinados y posteriormente desparafinadas en xilol y rehidratadas en alcoholes de graduación creciente, por inmersiones secuenciales. Se realizó la recuperación antigénica mediante calor durante 20 minutos, con una solución de recuperación de citrato 0.01M (pH 6). La técnica inmunohistoquímica utilizada, NovoLinkTM Polymer Detection Systems (PDE), emplea anticuerpos monoclonales diluidos convenientemente, válidos para tejidos incluidos en parafina. La inmunotinción se basó en la utilización de un polímero de alto peso molecular al que se conjugan covalentemente un gran número de moléculas de enzima y de anticuerpo secundario. Paralelamente las muestras fueron procesadas por la técnica de inmunoadherencia específica, se desparafinaron por cambios en solvente xilol y alcohol y se colorearon con hematoxilina. Las secciones fueron incubadas con antisuero monoclonal anti-A, anti-B o lectina anti-H (Ulex europeus), en concentración óptima de acuerdo al grupo sanguíneo de la paciente, y luego, cada sección fue cubierta con una suspensión de eritrocitos isogrupo al corte en estudio al 5% en PBS. Los preparados en ambas técnicas fueron observados por microscopia óptica y semicuantificados de una a cuatro cruces. Utilizando la primera técnica los cortes mostraron una conservación de los antígenos ABH en 5 pacientes, coincidentes con un diagnóstico anatomopatológico benigno. Aquellas, con diagnóstico anatomopatológico de cáncer de mama (n=22), presentaron deleción parcial en 9 de las muestras estudiadas, mientras que en las 13 restantes se halló pérdida total de la expresión antigénica. Las lesiones analizadas de cáncer de mama por la técnica de inmunoadherencia mostraron una deleción total de la expresión ABH en 17 cortes histológicos y deleción parcial en 5. En las muestras de pacientes sin diagnóstico anatomopatológico de cáncer se observó una conservación de los antígenos del sistema ABO (n=5). Los resultados de nuestro estudio muestran que la técnica PDE podría diferenciar entre pérdida total y parcial de estos antígenos, la misma produce menos fondo que la técnica de inmunoadherencia específica. PDE representaría un avance en la calidad de los métodos de inmunohistoquímica, pudiendo aplicarse en biopsias intraoperatorias ya que el tiempo de procesamiento es menor que la técnica de inmunoadherencia.